ForeDirect RT-qPCR komplet
Opis kompleta:
◮Za direktnu amplifikaciju RNK u realnom vremenu iz zbirki briseva bez procesa prečišćavanja RNK.Ovaj komplet završava cikluse qRT-PCR u roku od jednog sata.Mešavina enzima je optimizovana mešavina reverzne transkriptaze, Hot-Start Taq DNA polimeraze, inhibitora RNaze.Reakcioni pufer sadrži sve potrebne komponente, uključujući optimizirane komponente pufera, Mg2+, dUTP i dNTPs.
Opis
ForeDirect RT-qPCR komplet je dizajniran za direktno pojačavanje RNK u realnom vremenu iz zbirki briseva bez procesa prečišćavanja RNK.Ovaj komplet završava cikluse qRT-PCR u roku od jednog sata.Mešavina enzima je optimizovana mešavina reverzne transkriptaze, Hot-Start Taq DNA polimeraze, inhibitora RNaze.Reakcioni pufer sadrži sve potrebne komponente, uključujući optimizirane komponente pufera, Mg2+, dUTP i dNTPs.
Specifikacije
100T
Komponente kompleta
| Sredstvo za oslobađanje nukleinske kiseline |
| RNA zaštitnik |
| 2× RT-qPCR pufer |
| Enzimska smjesa (Taq&M-MLV) |
| Instrukcije |
PCR aplikacija
1. Nakon što su PCR reakcijske epruvete nakratko centrifugirane, stavite ih u rezervoar za uzorke instrumenta za pojačavanje.
2. Termički protokol
| Korak | Temperatura | Vrijeme | Ciklusi | |
| 1 | Reverzna transkripcija | 50℃ | 15 min | 1 |
| 2 | Pre-denaturacija | 95℃ | 1 min | 1 |
| 3 | Denaturacija | 95℃ | 10 sekundi | 42 |
| 4 | Anneal/Extension | 60℃ | 30 sekundi | |
Bilješka:Fluorescentni signal je detektovan odmah nakon koraka produžetka svakog ciklusa.
3. Nakon podešavanja, sačuvajte datoteku i pokrenite reakcijski program.
Operativni koraci
Prije pripreme reagensa, sve reagense u kompletu treba odmrznuti na sobnoj temperaturi i lagano promiješati.
Priprema reagensa
1. Pripremite mješavinu za oslobađanje nukleinske kiseline
| Komponenta | Volumen po uzorku ili kontroli |
| Sredstvo za oslobađanje nukleinske kiseline | 5μL |
| RNA zaštitnik | 0,5 μL |
2. Pripremite reakcijsku smjesu
| Komponenta | Volumen po uzorku ili kontroli |
| 2× RT-qPCR pufer | 15 μL |
| Enzimska smjesa (Taq&M-MLV) | 1,5 μL |
| Prajmeri i sonde | 1μL |
Skladištenje i rok trajanja
-Komplet treba čuvati na -20± 5℃.Rok važenja je 12 mjeseci.
-Izbjegavajte ponavljanje ciklusa zamrzavanja-odmrzavanja (<5 ciklusa).
