Cell Direct RT qPCR komplet—SYBR GREEN I Kompleti za qRT-PCR u jednom koraku spremni za direktnu ćelijsku lizu
Opisi
Ovaj komplet koristi jedinstveni puferski sistem za lizu koji može brzo osloboditi RNK iz uzoraka kultiviranih ćelija za RT-qPCR reakcije, čime se eliminiše dugotrajan i naporan proces prečišćavanja RNK.RNK šablon se može dobiti za samo 7 minuta.5×Direct RT mix i 2×Direktni qPCR Mix-SYBR reagensi koji se nalaze u kompletu mogu brzo i efikasno dobiti kvantitativne PCR rezultate u realnom vremenu.
5×Direct RT mix i 2×Direktni qPCR Mix-SYBR ima jaku toleranciju na inhibitore, a lizat uzoraka se može koristiti kao šablon za RT-qPCR direktno.Ovaj komplet sadrži jedinstvenu RNA visokog afiniteta Foregene reverznu transkriptazu i Hot D-Taq DNK polimerazu, dNTP, MgCl2, reakcijski pufer, PCR optimizator i stabilizator.
Specifikacije
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Komponente kompleta
| dio I | Buffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| Dio II | DNK Eraser |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX referentna boja | |
| ddH2O bez RNaze | |
| Instrukcije | |
Karakteristike&prednosti
■Jednostavno i efikasno: sa Cell Direct RT tehnologijom, uzorci RNK se mogu dobiti za samo 7 minuta.
■ Potreba za uzorkom je mala, može se testirati samo 10 ćelija.
■ Visoka propusnost: može brzo detektovati RNK u ćelijama kultivisanim u pločama sa 384, 96, 24, 12, 6 jažica.
■ DNK Eraser može brzo ukloniti oslobođene genome, značajno smanjiti utjecaj na naknadne eksperimentalne rezultate.
■ Optimizovani RT i qPCR sistem čini dvostepenu RT-PCR reverznu transkripciju efikasnijom, a PCR specifičnijim i otpornijim na inhibitore RT-qPCR reakcije.
Aplikacija kompleta
Područje primjene: kultivirane ćelije.
- RNK oslobođena lizom uzorka: primjenjivo samo na RT-qPCR šablon ovog kompleta.
- Komplet se može koristiti u sljedeće svrhe: analiza genske ekspresije, provjera efekta utišavanja gena posredovanog siRNA, skrining lijekova, itd.
Dijagram
Skladištenje i rok trajanja
Dio I ovog kompleta treba čuvati na 4℃;Dio II treba čuvati na -20℃.
Foregene Protease Plus II treba čuvati na 4℃, ne smrzavati na -20 ℃.
Reagens 2×Direktni qPCR Mix-SYBR treba čuvati na -20℃po mraku;ako se često koristi, može se čuvati i na 4℃ za kratkotrajno skladištenje (iskoristite u roku od 10 dana).
Principi dizajna prajmera za PCR u realnom vremenu
Forward Primer i Reverse Primer
Za PCR u realnom vremenu, dizajn prajmera je veoma važan.Prajmeri se odnose na specifičnost i efikasnost PCR amplifikacije, a mogu se dizajnirati prema sljedećim principima:
Dužina prajmera: 18-30bp.
GC sadržaj: 40-60%.
Tm vrijednost: Softver za dizajn prajmera, kao što je Primer 5, može dati Tm vrijednost prajmera.Vrijednosti Tm uzvodnih i nizvodnih prajmera trebaju biti što je moguće bliže.Može se koristiti i formula za proračun Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Prilikom izvođenja PCR-a, temperatura ispod Tm vrijednosti prajmera od 5 °C općenito se bira kao temperatura žarenja (odgovarajuće povećanje temperature žarenja može povećati specifičnost PCR reakcije).
Prajmeri i PCR proizvodi:
Dizajn prajmera PCR amplifikacije dužine proizvoda je poželjno 100-150bp.
Dizajnerske prajmere u sekundarnoj strukturnoj oblasti šablona treba izbegavati što je više moguće.
Izbjegavajte stvaranje 2 ili više komplementarnih baza između 3′ krajeva uzvodnih i nizvodnih prajmera.
Prajmer 3′ terminalna baza ne može biti prisutna sa 3 dodatna uzastopna G ili C.
Sami prajmeri ne mogu imati komplementarne strukture, inače će se formirati struktura ukosnice koja utiče na PCR amplifikaciju.
ATCG bi trebao biti raspoređen što je moguće ravnomjernije u sekvenci prajmera, a 3′ terminalnu bazu treba izbjegavati kao T.
Dodatak 1: Cell Direct RT-qPCR Kit komponentni paket dodataka
1.Rastvor za lizu ćelija
|
| |||
| Komponente kompleta (sistem za lizu sa 24 jažice / bunar) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| PartI | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartII | DNK Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| Komponente kompleta (20 μl reakcijski sistem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| ddH bez RNaze2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Komponente kompleta (20 μl reakcijski sistem) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX referentna boja | 40 μl | 200 μl |
| ddH bez RNaze2O | 1,7 ml | 10 ml |
Uputstva za upotrebu:
