PCR u realnom vremenu Easyᵀᴹ-Taqman
Opisi kompleta
2X Real PCR EasyTMMix-Taqman koji obezbeđuje Real Time PCR EasyTM-Taqman komplet je novi premiks sistem koji koristi specifične fluorescentne sonde za reakcije PCR amplifikacije u realnom vremenu, koje mogu uveliko poboljšati specifičnost proizvoda i osjetljivost reakcije.ROX se isporučuje kao boja za internu kontrolu.
2X Real PCR EasyTMMix-Taqman sadrži Foregene jedinstvenu Taq DNK polimerazu sa vrućim startom.U poređenju sa običnim Taq enzimima, ima prednosti visoke efikasnosti amplifikacije, jake specifične sposobnosti amplifikacije i niske stope neusklađenosti.Može smanjiti nespecifično pojačanje i poboljšati tačnost PCR-a.
Specifikacije
PCR u realnom vremenu jednostavnoTM-Taqman | ||||
Sastav kompleta (20μl sistem) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
200T | 500T | 1000T | 2000T | |
2×Pravi PCRLakoTMMix-Taqman | 1 ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
20×ROX referentna boja | 200 μl | 0.5ml | 1 ml | 1 ml × 2 |
ddH bez DNaze2O | 1,7 ml | 1.7 ml ×2 | 10 ml | 20 ml |
Instruction | 1 | 1 | 1 | 1 |
Karakteristike&prednosti
■ Jednostavno—2X PCR mešavina za smanjenje eksperimentalne greške i vreme rada
■ Specifično—optimizirani pufer i Taq enzim s vrućim startom mogu spriječiti nespecifično pojačavanje i formiranje dimera prajmera
■ Visoka osjetljivost—može otkriti male kopije šablona
■ Dobra svestranost—kompatibilna sa većinom kvantitativnih PCR instrumenata u realnom vremenu
Aplikacija kompleta
qPCR analiza
Radni tok
Graphic
Skladištenje i rok trajanja
Ovaj komplet treba čuvati dalje od svjetlosti i treba ga čuvati na -20℃.Ako se često koristi, može se čuvati i na 4℃ u kratkom vremenskom periodu (10 dana).
Nema pojačanja signala
1.Taq DNK polimeraza u kompletu gubi svoju aktivnost zbog nepravilnog skladištenja ili isteka kompleta.
Preporuka: Potvrdite uslove skladištenja kompleta;ponovo dodajte odgovarajuću količinu Taq DNK polimeraze u PCR sistem ili kupite novi komplet za PCR u realnom vremenu za povezane eksperimente.
2. Postoji mnogo inhibitora Taq DNK polimeraze u DNK šablonu.
Prijedlog: Pročistite šablon ili smanjite količinu korištenog šablona.
3. Koncentracija Mg2+ nije prikladna.
Preporuka: Koncentracija Mg2+ u 2× Real PCR mješavini koju pružamo je 3,5 mM.Međutim, za neke posebne prajmere i šablone, koncentracija Mg2+ može biti veća.Stoga možete direktno dodati MgCl2 kako biste optimizirali koncentraciju Mg2+.Preporučuje se povećanje Mg2+ za 0,5mM svaki put radi optimizacije.
4. Uslovi PCR amplifikacije nisu prikladni, a sekvenca prajmera ili koncentracija je neodgovarajuća.
Prijedlog: potvrdite ispravnost sekvence prajmera i prajmer nije degradiran;ako signal pojačanja nije dobar, pokušajte sniziti temperaturu žarenja i na odgovarajući način prilagoditi koncentraciju prajmera.
5. Količina šablona je premala ili prevelika.
Preporuka: Izvršite razblaživanje gradijentom linearizacije šablona i izaberite koncentraciju šablona sa najboljim PCR efektom za PCR eksperiment u realnom vremenu.
NTC ima previsoku vrijednost fluorescencije
1. Kontaminacija reagensom uzrokovana tokom rada.
Preporuka: Zamijenite novim reagensima za PCR eksperimente u realnom vremenu.
2. Do kontaminacije je došlo tokom pripreme PCR reakcijskog sistema.
Preporuka: Poduzmite potrebne zaštitne mjere tokom rada, kao što su: nošenje rukavica od lateksa, korištenje vrha pipete sa filterom itd.
3. Prajmeri su degradirani, a degradacija prajmera će uzrokovati nespecifično pojačanje.
Prijedlog: Koristite SDS-PAGE elektroforezu da otkrijete da li su prajmeri degradirani i zamijenite ih novim prajmerima za PCR eksperimente u realnom vremenu.
Dimer prajmera ili nespecifična amplifikacija
1. Koncentracija Mg2+ nije prikladna.
Preporuka: Koncentracija Mg2+ 2× Real PCR EasyTM mješavine koju nudimo je 3,5 mM.Međutim, za neke posebne prajmere i šablone, koncentracija Mg2+ može biti veća.Stoga možete direktno dodati MgCl2 kako biste optimizirali koncentraciju Mg2+.Preporučuje se povećanje Mg2+ za 0,5mM svaki put radi optimizacije.
2. Temperatura PCR žarenja je preniska.
Prijedlog: Svaki put povećajte temperaturu PCR žarenja za 1℃ ili 2℃.
3. PCR proizvod je predugačak.
Preporuka: Dužina PCR proizvoda u realnom vremenu treba da bude između 100-150bp, ne više od 500bp.
4. Prajmeri su degradirani, a degradacija prajmera će dovesti do pojave specifične amplifikacije.
Prijedlog: Koristite SDS-PAGE elektroforezu da otkrijete da li su prajmeri degradirani i zamijenite ih novim prajmerima za PCR eksperimente u realnom vremenu.
5. PCR sistem je neispravan ili je sistem premali.
Prijedlog: PCR reakcijski sistem je premali, što će uzrokovati smanjenje tačnosti detekcije.Najbolje je koristiti sistem reakcije koji preporučuje kvantitativni PCR instrument za ponovno izvođenje PCR eksperimenta u realnom vremenu.
Slaba ponovljivost kvantitativnih vrijednosti
1. Instrument je neispravan.
Prijedlog: Može postojati greške između svake PCR rupe na instrumentu, što rezultira lošom ponovljivošću tokom upravljanja temperaturom ili detekcije.Molimo provjerite prema uputama odgovarajućeg instrumenta.
2. Čistoća uzorka nije dobra.
Preporuka: Nečisti uzorci će dovesti do loše ponovljivosti eksperimenta, što uključuje čistoću šablona i prajmera.Najbolje je ponovo pročistiti šablon, a prajmeri se najbolje pročišćavaju pomoću SDS-PAGE.
3. Vrijeme pripreme i skladištenja PCR sistema je predugo.
Preporuka: Koristite PCR sistem u realnom vremenu za PCR eksperiment odmah nakon pripreme i ne ostavljajte ga predugo po strani.
4. Uslovi PCR amplifikacije nisu prikladni, a sekvenca prajmera ili koncentracija je neodgovarajuća.
Prijedlog: potvrdite ispravnost sekvence prajmera i prajmer nije degradiran;ako signal pojačanja nije dobar, pokušajte sniziti temperaturu žarenja i na odgovarajući način prilagoditi koncentraciju prajmera.
5. PCR sistem je neispravan ili je sistem premali.
Prijedlog: PCR reakcijski sistem je premali, što će uzrokovati smanjenje tačnosti detekcije.Najbolje je koristiti sistem reakcije koji preporučuje kvantitativni PCR instrument za ponovno izvođenje PCR eksperimenta u realnom vremenu.