Cell Total RNA Isolation Kit Kompleti za pročišćavanje totalne RNA Isolation iz ćelije
Opis kompleta:
Visoko pročišćena i visokokvalitetna ukupna RNK može se dobiti iz različitih kultiviranih ćelija za 11 minuta.
RNase-Free
Radi na sobnoj temperaturi (15-25℃)
Sa kolonom za čišćenje DNK
Visok prinos RNK
Brzo: Završite ekstrakciju za 11 minuta
Sigurnost: Ništa Organska hemikalija
Opis
Ovaj komplet koristi spin kolonu i formulu koju je razvio Foregene, koja može efikasno ekstrahovati ukupnu RNK visoke čistoće i visokog kvaliteta iz ćelija uzgajanih u pločama sa 96, 24, 12 i 6 jažica.
Komplet pruža efikasnu kolonu za čišćenje DNK, koja može lako odvojiti supernatant i ćelijski lizat, vezati i ukloniti genomsku DNK.Operacija je jednostavna i štedi vrijeme.
TKolona koja sadrži samo RNK može efikasno da veže RNK sa jedinstvenom formulom.Veliki broj uzoraka može se obraditi istovremeno.
Komponente kompleta
| Sastav kompleta | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 mL | 100 mL |
| Pufer cRL2 | 15 mL | 60 mL |
| Međuspremnik RW1* | 25 mL | 100 mL |
| Buffer RW2 | 24 mL | 96 mL |
| ddH2O bez RNaze | 10 mL | 40 mL |
| Kolona samo za RNA | 50 | 200 |
| Kolona za čišćenje DNK | 50 | 200 |
| Uputstvo | 1 | 1 |
*Molimo da nosite rukavice i poduzmite zaštitne mjere tokom rada jer pufer cRL1 i pufer RW1 sadrže iritirajuće haotropne soli.
Karakteristike&prednosti
■ Ceo proces se odvija na sobnoj temperaturi (15-25℃), bez ledene kupke i niskotemperaturnog centrifugiranja.
■ Cijeli komplet je bez RNase, nema potrebe da brinete o degradaciji RNK.
■ Kolona za čišćenje DNK specifično vezuje DNK, tako da komplet može ukloniti kontaminaciju genomske DNK bez dodavanja dodatne DNAze.
■ Visok prinos RNK: Kolona koja sadrži samo RNK i jedinstvena formula mogu efikasno prečistiti RNK.
■ Velika brzina: jednostavan za rukovanje i može se završiti za 11 minuta.
■ Sigurnost: Nije potreban organski reagens.
■ Visok kvalitet: Prečišćena RNK je visoke čistoće, bez proteina i drugih nečistoća, i može ispuniti različite naknadne eksperimente.
Aplikacija kompleta
Pogodan je za ekstrakciju i pročišćavanje ukupne RNK iz kultiviranih ćelija u pločama sa 96, 24, 12 i 6 jažica.
Radni tok
Dijagram
Dijagram baterije sa agaroznim gelom kompleta za izolaciju Cell Total RNK tretira gore navedene različite brojeve ćelija, 20 μl zapreminskog eluiranja, uzmite 2 μl prečišćene ukupne RNK 1%.
Skladištenje i rok trajanja
Komplet se može čuvati 12 mjeseci na sobnoj temperaturi (15–25 ℃) ili 2–8 ℃ duže vrijeme (24 mjeseca).
Pufer cRL1 se može čuvati na 4 ℃ 1 mjesec nakon dodavanja 2-hidroksi-1-etanetiola (opciono).
RNK se ne ekstrahuje ili je prinos RNK nizak
Često postoji niz faktora koji utiču na efikasnost oporavka, kao što su: sadržaj RNK uzorka tkiva, način rada, zapremina eluiranja, itd.
1. Ledeno kupatilo ili kriogeno (4 °C) centrifugiranje je izvedeno tokom rada.
Preporuka: Radite na sobnoj temperaturi (15-25°C) tokom čitavog procesa, nemojte kupati u ledenoj kupki i centrifugirati na niskim temperaturama.
2. Nepravilno očuvanje uzorka ili prekomjerno vrijeme skladištenja uzorka.
Preporuka: Čuvajte uzorke na -80 °C ili zamrznite u tekućem dušiku i izbjegavajte ponovnu upotrebu zamrzavanja-odmrzavanja;pokušajte koristiti svježe tkivo ili kultivirane stanice za ekstrakciju RNK.
3. Nedovoljna liza uzorka.
Preporuka: Kada homogenizujete tkivo, uverite se da je tkivo dovoljno homogeno i da su ćelije tkiva dovoljno podeljene da objasni oslobađanje RNK.
4. Eluent nije dodan ispravno.
Preporuka: Potvrdite da je ddH bez RNase2O se dodaje u kapima u sredinu membrane kolone za prečišćavanje.
5. Tačan volumen apsolutnog etanola nije dodat u pufer RL2 ili pufer RW2.
Preporuka: Slijedite upute, dodajte tačnu količinu apsolutnog etanola u pufer RL2 i pufer RW2 i dobro promiješajte prije upotrebe kompleta.
6. Doziranje uzorka tkiva nije prikladno.
Preporuka: Koristite 10-20 mg tkiva ili (1-5) × 106ćelija po 500 μl pufera RL1, jer prekomjerna upotreba tkiva može rezultirati smanjenom ekstrakcijom RNK.
7. Nepravilna zapremina eluiranja ili nepotpuno eluiranje.
Preporuka: Volumen eluiranja kolone za prečišćavanje je 50-200 μl;ako efekat eluiranja nije zadovoljavajući, preporučuje se produžiti vrijeme postavljanja na sobnu temperaturu nakon dodavanja prethodno zagrijanog ddH bez RNase2O, npr. 5-10 min.
8. Kolona za prečišćavanje ima ostatak etanola nakon ispiranja pufera RW2.
Preporuka: Ako postoji ostatak etanola nakon ispiranja pufera RW2, centrifugiranja prazne epruvete 1 min, vrijeme za operaciju centrifugiranja prazne epruvete može se povećati na 2 minute ili se kolona za pročišćavanje može staviti na sobnu temperaturu na 5 minuta kako bi se adekvatno uklonio preostali etanol.
Prečišćena RNK se razgrađuje
Kvalitet pročišćene RNK povezan je s faktorima kao što su očuvanje uzorka, kontaminacija RNK-azom i manipulacija, itd.
1. Uzorci tkiva se ne čuvaju na vrijeme.
Preporuka: Ako se uzorci tkiva ili ćelije ne koriste na vrijeme nakon sakupljanja, odmah ih kriokonzervirati na -80 °C ili tečnom dušiku.Za ekstrakciju RNK koristite novo uzeto tkivo ili uzorak ćelije kad god je to moguće.
2. Ponovljeno zamrzavanje-odmrzavanje uzoraka tkiva.
Preporuka: Prilikom pohranjivanja uzoraka tkiva, najbolje ih je izrezati na male komadiće radi očuvanja, a prilikom upotrebe ukloniti jedan od komada kako bi se izbjeglo ponovno zamrzavanje-odmrzavanje uzorka i degradacija RNK.
3. RNase se uvodi ili ne nosi jednokratne rukavice, maske i sl. tokom operacije.
Preporuka: Eksperimente ekstrakcije RNK najbolje je izvoditi u odvojenim prostorijama za manipulaciju RNK, a sto se čisti prije eksperimenta.
Nosite jednokratne rukavice i maske tokom eksperimenta kako biste smanjili degradaciju RNK uzrokovanu uvođenjem RNase.
4. Reagensi su kontaminirani RNase tokom upotrebe.
Preporuka: Zamijenite novim kompletom za izolaciju ukupne RNA životinja za povezane eksperimente.
5. Centrifugalne epruvete, vrhovi itd. koji se koriste u RNA manipulaciji su kontaminirani RNase.
Preporuka: Potvrdite da su centrifugalne epruvete, vrhovi, pipete, itd. koji se koriste za ekstrakciju RNK, sve bez RNKaze.
Pročišćena dobijena RNK utiče na nizvodne eksperimente
RNK pročišćena kolonom za pročišćavanje, ako je ioni soli, sadržaj proteina prevelik, utjecat će na nizvodni eksperiment, kao što su: reverzna transkripcija,Northern Blot et al.
1. Eluirana RNK ima ostatke jona soli.
Preporuka: Potvrdite da je tačna zapremina etanola dodata puferu RW2 i izvršite 2 ispiranja kolone za prečišćavanje pri centrifugalnoj brzini naznačenoj za rad;ako ima ostataka jona soli, ostavite kolonu za prečišćavanje u puferu RW2 5 minuta na sobnoj temperaturi i izvršite centrifugiranje kako biste maksimalno uklonili kontaminaciju soli.
2. Ostatak etanola u eluiranoj RNK.
Preporuka: Potvrdite da nakon ispiranja pufera RW2 izvršite operaciju centrifugiranja prazne epruvete pri brzini centrifugiranja naznačenoj za rad, povećajte vrijeme operacije centrifugiranja prazne epruvete na 2 min ako još ima ostataka etanola ili ostavite na sobnoj temperaturi 5 m
