Komplet za izolaciju ukupne RNA za životinje Kompleti za ekstrakciju i pročišćavanje ukupne RNA za životinjska tkiva i ćelije
Opis kompleta:
Brzo i efikasno izdvajanje ukupne RNK visoke čistoće i visokog kvaliteta iz različitih životinjskih tkiva.
Nema potrebe da brinete o degradaciji RNK.Cijeli sistem je bez RNase
Efikasno uklonite DNK pomoću kolone za čišćenje DNK
Uklonite DNK bez dodavanja DNaze
Jednostavno—sve operacije se obavljaju na sobnoj temperaturi
Brzo—operacija se može završiti za 30 minuta
Bezbedan – ne koristi se organski reagens
Visoka čistoća—OD260/280≈1,8-2,1
Opisi kompleta
50 priprema, 200 priprema
Ovaj komplet koristispin kolona i formulakoju je razvila naša kompanija, koja može ekstrahovati ukupnu RNK visoke čistoće i visokog kvaliteta iz različitih životinjskih tkiva sa visokom efikasnošću. Obezbeđuje efikasnu kolonu za čišćenje DNK, koja može lako da odvoji i adsorbuje genomsku DNK iz supernatanta i lizata tkiva, jednostavno i štedi vreme;Kolona samo sa RNK može efikasno da veže RNK i može se istovremeno obraditi sa jedinstvenom formulom Puno uzoraka.
Čitav sistem je bez RNase, tako da se ekstrahovana RNK ne degradira;Pufer RW1, Pufer RW2 sistem za pranje pufera, tako da dobijena RNK ne sadrži zagađenje proteinima, DNK, jonima i organskim jedinjenjima.
Komponente kompleta
| Komplet za izolaciju ukupne RNK životinja | ||
| Komponente kompleta | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Međuspremnik RL1* | 25ml | 100ml |
| Pufer RL2 | 15ml | 60ml |
| Međuspremnik RW1* | 25ml | 100ml |
| Buffer RW2 | 24ml | 96ml |
| ddH2O bez RNaze | 10ml | 40ml |
| Kolona samo za RNK | 50 | 200 |
| Kolona za čišćenje DNK | 50 | 200 |
| Uputstvo za upotrebu | 1 komad | 1 komad |
Informacije o proizvodu
| Format | Spin column | Komponenta za prečišćavanje | Foregen kolona, reagens |
| Tok | 1-24 uzorka | Vrijeme za pripremu | ~30 min (24 uzorka) |
| Centrifuga | Stolna centrifuga | Pirolizno odvajanje | Centrifugalno odvajanje |
| Uzorak | Životinjsko tkivo;ćelija | Količina uzoraka | Tkivo: 10-20 mg;Ćelija:(1-5)×106 |
| Volumen eluiranja | 50-200 μL | Maksimalna zapremina utovara | 850 μL |
Karakteristike&prednosti
■ Nema potrebe da brinete o degradaciji RNK;cijeli sistem je bez RNase
■ Efikasno uklonite DNK koristeći kolonu za čišćenje DNK
■ Uklonite DNK bez dodavanja DNaze
■ Jednostavne-sve operacije se obavljaju na sobnoj temperaturi
■ Brzi rad se može završiti za 30 minuta
■ Sigurno - nije potreban organski reagens
■ Visoka čistoća -OD260/280≈1,8-2,1
Aplikacija kompleta
Pogodan je za ekstrakciju i pročišćavanje ukupne RNK iz raznih svježih ili smrznutih životinjskih tkiva ili kultiviranih stanica.
Parametri proizvoda
■ Niže aplikacije: sinteza prvog lanca cDNK, RT-PCR, molekularno kloniranje, Northern blot, itd.
■ Uzorci: životinjska tkiva, kultivisane ćelije
■ Doziranje: tkiva 10-20 mg, ćelije (2-5)×106
■ Maksimalni kapacitet vezivanja DNK kolone za prečišćavanje: 80 μg
■ Volumen eluiranja: 50-200 μl
Dijagram
Komplet za izolaciju ukupne RNA životinja tretiran 20 mg
Svježe uzorke miša, uzmite 5% pročišćene ukupne RNK 1% agar
Glikogel elektroforeza
1: Slezena 2: Bubreg
3: Jetra 4: Srce
Skladištenje i rok trajanja
Komplet se može čuvati 24 mjeseca na sobnoj temperaturi (15–25 ℃) ili 2–8 ℃ duže vrijeme.Pufer RL1 se može čuvati na 4 ℃ 1 mjesec nakon dodavanja β-merkaptoetanola (opciono).
Citirani članci
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.mRNA napunjene lipidima slične nanočestice za uređivanje baze jetre putem optimizacije centralnog kompozitnog dizajna.Adv.Funct.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.Spontana apoptoza ćelija u terapijskom preparatu matičnih ćelija ima imunomodulatorno dejstvo oslobađanjem fosfatidilserina.Signal Transduct Target Ther.2021. jul 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17,97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.Modifikacija tRNA N7-metilguanozina poboljšava onkogenu translaciju mRNA i promoviše progresiju intrahepatičnog holangiokarcinoma.Mol Cell.29. jul 2021.: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Mettl14 posredovana m6A modifikacija olakšava regeneraciju jetre održavanjem homeostaze endoplazmatskog retikuluma.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Kompleti za izolaciju RNK za drugi izvori uzorakaje dostupno:
Ćelija, biljka, virus, krv, itd.
RNK se ne ekstrahuje ili je prinos RNK nizak
Često postoji niz faktora koji utiču na efikasnost oporavka, kao što su: sadržaj RNK uzorka tkiva, način rada, zapremina eluiranja, itd.
1. Ledeno kupatilo ili kriogeno (4 °C) centrifugiranje je izvedeno tokom rada.
Preporuka: Radite na sobnoj temperaturi (15-25°C) tokom čitavog procesa, nemojte kupati u ledenoj kupki i centrifugirati na niskim temperaturama.
2. Nepravilno očuvanje uzorka ili prekomjerno vrijeme skladištenja uzorka.
Preporuka: Čuvajte uzorke na -80 °C ili zamrznite u tekućem dušiku i izbjegavajte ponovnu upotrebu zamrzavanja-odmrzavanja;pokušajte koristiti svježe tkivo ili kultivirane stanice za ekstrakciju RNK.
3. Nedovoljna liza uzorka.
Preporuka: Kada homogenizujete tkivo, uverite se da je tkivo dovoljno homogeno i da su ćelije tkiva dovoljno podeljene da objasni oslobađanje RNK.
4. Eluent nije dodan ispravno.
Preporuka: Potvrdite da je ddH bez RNase2O se dodaje u kapima u sredinu membrane kolone za prečišćavanje.
5. Tačan volumen apsolutnog etanola nije dodat u pufer RL2 ili pufer RW2.
Preporuka: Slijedite upute, dodajte tačnu količinu apsolutnog etanola u pufer RL2 i pufer RW2 i dobro promiješajte prije upotrebe kompleta.
6. Doziranje uzorka tkiva nije prikladno.
Preporuka: Koristite 10-20 mg tkiva ili (1-5) × 106ćelija po 500 μl pufera RL1, jer prekomjerna upotreba tkiva može rezultirati smanjenom ekstrakcijom RNK.
7. Nepravilna zapremina eluiranja ili nepotpuno eluiranje.
Preporuka: Volumen eluiranja kolone za prečišćavanje je 50-200 μl;ako efekat eluiranja nije zadovoljavajući, preporučuje se produžiti vrijeme postavljanja na sobnu temperaturu nakon dodavanja prethodno zagrijanog ddH bez RNase2O, npr. 5-10 min.
8. Kolona za prečišćavanje ima ostatak etanola nakon ispiranja pufera RW2.
Preporuka: Ako postoji ostatak etanola nakon ispiranja pufera RW2, centrifugiranja prazne epruvete 1 min, vrijeme za operaciju centrifugiranja prazne epruvete može se povećati na 2 minute ili se kolona za pročišćavanje može staviti na sobnu temperaturu na 5 minuta kako bi se adekvatno uklonio preostali etanol.
Prečišćena RNK se razgrađuje
Kvalitet pročišćene RNK povezan je s faktorima kao što su očuvanje uzorka, kontaminacija RNK-azom i manipulacija, itd.
1. Uzorci tkiva se ne čuvaju na vrijeme.
Preporuka: Ako se uzorci tkiva ili ćelije ne koriste na vrijeme nakon sakupljanja, odmah ih kriokonzervirati na -80 °C ili tečnom dušiku.Za ekstrakciju RNK koristite novo uzeto tkivo ili uzorak ćelije kad god je to moguće.
2. Ponovljeno zamrzavanje-odmrzavanje uzoraka tkiva.
Preporuka: Prilikom pohranjivanja uzoraka tkiva, najbolje ih je izrezati na male komadiće radi očuvanja, a prilikom upotrebe ukloniti jedan od komada kako bi se izbjeglo ponovno zamrzavanje-odmrzavanje uzorka i degradacija RNK.
3. RNase se uvodi ili ne nosi jednokratne rukavice, maske i sl. tokom operacije.
Preporuka: Eksperimente ekstrakcije RNK najbolje je izvoditi u odvojenim prostorijama za manipulaciju RNK, a sto se čisti prije eksperimenta.
Nosite jednokratne rukavice i maske tokom eksperimenta kako biste smanjili degradaciju RNK uzrokovanu uvođenjem RNase.
4. Reagensi su kontaminirani RNase tokom upotrebe.
Preporuka: Zamijenite novim kompletom za izolaciju ukupne RNA životinja za povezane eksperimente.
5. Centrifugalne epruvete, vrhovi itd. koji se koriste u RNA manipulaciji su kontaminirani RNase.
Preporuka: Potvrdite da su centrifugalne epruvete, vrhovi, pipete, itd. koji se koriste za ekstrakciju RNK, sve bez RNKaze.
Pročišćena dobijena RNK utiče na nizvodne eksperimente
RNK pročišćena kolonom za pročišćavanje, ako je ioni soli, sadržaj proteina prevelik, utjecat će na nizvodni eksperiment, kao što su: reverzna transkripcija,Northern Blot et al.
1. Eluirana RNK ima ostatke jona soli.
Preporuka: Potvrdite da je tačna zapremina etanola dodata puferu RW2 i izvršite 2 ispiranja kolone za prečišćavanje pri centrifugalnoj brzini naznačenoj za rad;ako ima ostataka jona soli, ostavite kolonu za prečišćavanje u puferu RW2 5 minuta na sobnoj temperaturi i izvršite centrifugiranje kako biste maksimalno uklonili kontaminaciju soli.
2. Ostatak etanola u eluiranoj RNK.
Preporuka: Potvrdite da nakon ispiranja pufera RW2 izvršite operaciju centrifugiranja prazne epruvete pri brzini centrifugiranja naznačenoj za rad, povećajte vrijeme operacije centrifugiranja prazne epruvete na 2 minute ako još ima ostataka etanola ili ostavite na sobnoj temperaturi 5 minuta nakon centrifugiranja prazne epruvete kako biste maksimizirali uklanjanje resorpcije.
