Komplet za izolaciju ukupne RNA plus komplet za pročišćavanje ukupne RNA za biljke bogate polisaharidima i polifenolima
Opis kompleta:
Kat.br.RE-05021/05022/05024
Za pročišćavanje ukupne RNK iz općih biljnih uzoraka koji sadrže visoke polisaharide i polifenolne komponente.
Brzo ekstrahirajte visokokvalitetnu ukupnu RNK iz biljnih uzoraka s visokim sadržajem polisaharida i polifenola.
Bez RNaze pomoću kolone za čišćenje DNK
Jednostavno—sve operacije se obavljaju na sobnoj temperaturi
Brzo—operacija se može završiti za 30 minuta
Bezbedan – ne koristi se organski reagens 
Specifikacije
50 priprema, 200 priprema
Komplet koristi spin kolonu i formulu koju je razvio Foregene, koja može efikasno ekstrahovati ukupnu RNK visoke čistoće i visokog kvaliteta iz različitih biljnih tkiva sa visokim sadržajem polisaharida ili polifenola.Obezbeđuje kolonu za čišćenje DNK koja može lako ukloniti genomsku DNK iz supernatanta i lizata tkiva.Kolona koja sadrži samo RNK može efikasno da veže RNK.Komplet može obraditi veliki broj uzoraka u isto vrijeme.
Čitav sistem ne sadrži RNKazu, tako da se pročišćena RNK neće razgraditi.Pufer PRW1 i pufer PRW2 mogu osigurati da dobijena RNK nije kontaminirana proteinima, DNK, jonima i organskim jedinjenjima.
Komponente kompleta
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| ddH bez RNaze2O, Kolona za čišćenje DNK |
| Kolona samo za RNA |
Karakteristike&prednosti
■ Rad na sobnoj temperaturi (15-25℃) tokom cijelog procesa, bez ledene kupke i niskotemperaturnog centrifugiranja.
■ Kompletan komplet bez RNase, nema potrebe da brinete o degradaciji RNK.
■ Posebno pogodan za prečišćavanje RNK iz biljnih uzoraka polisaharida i polifenola.
■ Kolona za čišćenje DNK specifično se vezuje za DNK, tako da komplet može ukloniti kontaminaciju genomske DNK bez dodavanja DNaze.
■ Visok prinos RNK: Kolona koja sadrži samo RNK i jedinstvena formula mogu efikasno prečistiti RNK.
■ Velika brzina: jednostavan za rukovanje i može se završiti u roku od 30 minuta.
■ Sigurnost: nije potreban organski reagens.
■ Visok kvalitet: Prečišćeni RNA fragmenti su visoke čistoće, bez proteina i drugih nečistoća, i mogu zadovoljiti različite nizvodne eksperimentalne primjene.
Parametri proizvoda
■ Niže aplikacije: sinteza prvog lanca cDNK, RT-PCR, molekularno kloniranje, Northern blot, itd.
■ Uzorak: svježa ili smrznuta biljna tkiva polisaharida i polifenola
■ Doziranje: 50mg biljnog tkiva
■ Maksimalni kapacitet vezivanja RNK kolone za prečišćavanje: 80 μg
■ Volumen eluiranja: 50-200 μl
Aplikacija kompleta
Pogodan je za ekstrakciju i pročišćavanje ukupne RNK iz svježih ili smrznutih uzoraka biljnog tkiva (posebno svježeg biljnog lišća) s visokim sadržajem polisaharida i polifenola.
Radni tok
Dijagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus je obradio 50 mg svježih listova polisaharida i polifenola, a 5% pročišćene RNK je testirano elektroforezom.
1: Banana
2: Ginkgo
3: Pamuk
4: Nar
Skladištenje i rok trajanja
Ovaj komplet se može čuvati 24 meseca u suvim uslovima na sobnoj temperaturi (15-25℃);ako ga treba čuvati duže vrijeme, može se čuvati na 2–8 ℃.
Pufer PSL1 se može staviti na 4℃ 1 mjesec nakon dodavanja β-merkaptoetanola (preporučljivo je dodati u isto vrijeme eksperimenta).
Kolona se začepila
Nakon začepljenja kolone, prinos RNK je smanjen ili čak nemoguće pročistiti RNK, a dobijena RNK masa je niska.
Analiza uobičajenih uzroka:
1. Pauze uzoraka nisu temeljne.
Lomljenje uzorka ne uzrokuje potpuno blokiranje KOLONE ZA ČIŠĆENJE DNK, a utječe na prinos i kvalitet RNK.Preporučujemo brzu operaciju mljevenja u dovoljnoj količini tekućeg dušika kada razbijete uzorke. Pokušajte slomiti ćelijski zid uzorka, ćelijsku membranu i drugo tkivo.Za biljne uzorke poliol polisaharida, preporučujemo da koristite Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. Prilikom usisavanja odvojenog supernatanta uzorka pomoću kolone za čišćenje DNK, mogući ćelijski fragmentirani precipitat se može udahnuti.
Uzeti ćelijski fragmentirani sedimenti će uzrokovati kolonu SAMO RNK koja će biti blokirana kada se izvrši operacija adsorpcije RNK (pogledajte korak 6).Preporučujemo da pažljivo usisavate ovaj supernatant kako biste izbjegli usisavanje staničnih ostataka.
3. Početna količina uzorka je prevelika.
Prekomjerna upotreba uzorka će dovesti do nepotpune fragmentacije uzorka ili nepotpune ćelijske lize puferom PSL1, što će rezultirati blokadom kolone za prečišćavanje tokom prečišćavanja.Komplet za izolaciju ukupne RNK biljaka Svaki pojedinačni pročišćeni operativni uzorak je 50 mg.Za biljne uzorke poliol polisaharida, preporučujemo da isprobate Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. Temperatura centrifuge je preniska.
Cijeli proces izolacije i pročišćavanja RNK odvija se na sobnoj temperaturi (20-25°C), osim što je tkivo uzorka razbijeno tečnim azotom. Temperatura nekih kriogenih centrifuga je niža od 20℃, što može uzrokovati blokadu kolone za čišćenje DNK i/ili kolone samo za RNA.Ako se to dogodi, podesite temperaturu centrifuge na 20-25℃, iprovjerite jesu li smjesa za lizu i/ili supernatant s dodatkom etanola prethodno zagrijani na 37°C.
RNK se ne ekstrahuje ili je prinos RNK nizak
Obično postoji mnogo faktora koji utiču na efikasnost oporavka, kao što su: sadržaj RNK uzorka, način rada, zapremina eluiranja, itd.
Analiza uobičajenih uzroka kako slijedi:
1. U toku operacije izvršeno je ledeno kupatilo ili centrifugiranje na niskoj temperaturi (4°C).
Preporuka: Radite na sobnoj temperaturi (15-25°C) u cijelom procesu nemojte raditi ledenu kupku i niskotemperaturno centrifugiranje.
2. RNK je degradirana zbog nepravilnog čuvanja uzorka ili dugotrajnog čuvanja uzorka.
Preporuka: Svježe sakupljene uzorke treba brzo zamrznuti u tekućem dušiku, a zatim čuvati na -80°C duže vrijeme, izbjegavati ponovno zamrzavanje i odmrzavanje uzoraka;ili odmah potopite uzorke u otopinu RNA stabilizatora RNAlater (životinjski uzorci).
3. Nedovoljna fragmentacija uzorka i liza dovode do blokade kolone za prečišćavanje.
Prijedlog: Prilikom mljevenja tkiva provjerite da li je tkivo dovoljno mljeveno i brzo ga prebacite u unaprijed pripremljeni pufer PSL1 (potvrdite da je dodat tačan udio β-ME, pogledajte 1. korak postupka).
4.Eluent je dodan pogrešno.
Prijedlog: Uvjerite se da je ddH2O bez RNase ukapan u sredinu membrane kolone za prečišćavanje.
5. Tačan volumen apsolutnog etanola nije dodan u pufer PSL2 ili pufer PRW2.
Prijedlog: Molimo slijedite upute, dodajte tačnu količinu apsolutnog etanola u pufer PSL2 i pufer PRW2 i dobro promiješajte prije upotrebe kompleta.
6. Količina uzorka tkiva je neprikladna.
Preporuka: Koristite 50 mg tkiva na 500 μl pufera PSL1.Upotreba previše tkiva će smanjiti količinu ekstrahirane RNK, a čistoća rezultirajuće RNK će također biti smanjena.Izričito preporučujemo da početna doza uzorka ne prelazi 50 mg po operaciji ekstrakcije RNK.
7. Neodgovarajući volumen eluiranja ili nepotpuno eluiranje.
Preporuka: Volumen eluenta kolone za prečišćavanje je 50-200 μl;ako učinak eluiranja nije zadovoljavajući, preporučuje se produžiti vrijeme na sobnoj temperaturi nakon dodavanja prethodno zagrijanog ddH2O bez RNaze, kao što je 5-10 min.
8. Kolona za prečišćavanje ima ostatak etanola nakon ispiranja sa BufferPRW2.
Preporuka: Ako se prazna epruveta centrifugira 1 min, a nakon ispiranja u puferu PRW2 i dalje ima preostalog etanola, možete povećati vrijeme centrifugiranja prazne epruvete na 2 minute ili staviti kolonu za pročišćavanje na sobnu temperaturu na 5 minuta kako biste u potpunosti uklonili preostali etanol.
9.Kit je pogrešno korišten.
Prijedlog: Za biljne uzorke polifenolnih polisaharida, korištenje uobičajenih kompleta kao što je komplet za izolaciju ukupne RNA biljke možda neće moći dobiti idealne uzorke RNK.Preporučujemo vam da koristite Plant Total RNA IsolationKit Plus, koji je posebno dizajniran za uzorke biljaka polifenolnih polisaharida.Komplet posebno razvijen za ekstrakciju RNK iz biljnih uzoraka polifenola i polisaharida.
Vrijednost OD260/OD280 je niska
RNK eluiranje sa ddH2O i korišteno za očitavanja spektrofotometra rezultira niskim vrijednostima OD260/OD280.Preporučujemo upotrebu 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (umjesto ddH2O bez RNaze za eluiranje RNK) da biste dobili relativno tačne vrijednosti OD260/OD280, pogledajte “Analize koncentracije i pročišćavanja RNK” na stranici 19.
Prečišćena RNK se razgrađuje
Kvalitet pročišćene RNK povezan je s faktorima kao što su očuvanje uzorka, kontaminacija RNKazom i manipulacija.
Analiza uobičajenih uzroka:
1. Uzorci tkiva nisu pohranjeni na vrijeme nakon prikupljanja.
Preporuka: Ako se uzorci tkiva ne koriste na vrijeme nakon sakupljanja, molimo da ih odmah pohranite u tekućem dušiku na niskoj temperaturi ili ih premjestite na -80°C za dugotrajno skladištenje nakon brzog zamrzavanja u tekućem dušiku, ili odmah uronite uzorke u otopinu RNA stabilizatora RNAlater (životinjski uzorci).Za ekstrakciju RNK pokušajte koristiti svježe sakupljene uzorke tkiva.
2. Ponovljeno zamrzavanje i odmrzavanje uzoraka tkiva.
Preporuka: Prilikom pohranjivanja uzoraka tkiva, najbolje ih je izrezati na male komadiće radi očuvanja, a prilikom upotrebe izvaditi dio kako bi se izbjegla degradacija RNK uzrokovana ponovljenim zamrzavanjem i odmrzavanje uzoraka.
3.RNase se uvodi u operacijsku salu ili se ne nose jednokratne rukavice, maske itd.
Preporuka: Eksperimente ekstrakcije RNK najbolje je izvoditi u odvojenim RNA operacijama, a laboratorijski sto treba očistiti prije eksperimenta, a tokom eksperimenta treba nositi jednokratne rukavice i maske kako bi se izbjegla degradacija RNK uzrokovana uvođenjem RNase u najvećoj mjeri.
4. Reagens je kontaminiran RNazom tokom upotrebe.
Prijedlog: Zamijenite novom serijom kompleta za ekstrakciju ukupne RNK biljaka za povezane eksperimente.
5. Centrifugalne epruvete i vrhovi pipete koji se koriste za manipulaciju RNK kontaminirani su RNase.
Prijedlog: Uvjerite se da epruvete za centrifugiranje, vrhovi pipeta, pipete itd. koji se koriste za ekstrakciju RNK ne sadrže RNKazu.
Uputstva za upotrebu:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus Uputstvo za upotrebu
