QuickEasy Cell Direct RT-qPCR komplet (96 jažica) – SYBR Green I
Opisi
The(96 bunara) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR komplet–SYBR Green Ipružajedinstveni sistem pufera za lizuto brzo oslobađaju RNKiz kultivisane ćelijeuzorci za RT-qPCR reakcije, eliminišući dugotrajne i naporneProces pročišćavanja RNK i traje samo 7 minuta da se dobije potreban RNA šablon.The5× Direct RT Mixi2× Direct qPCR Mix-SYBRu kutiji može brzo iefektivno dobiti kvantitativne podatke u realnom vremenuPCR rezultati.
5× Direct RT Mix i 2× Direct qPCR Mix-SYBR imaju jaku toleranciju na inhibitore i mogu koristiti lizat uzorka koji se testira kao šablon za efikasnu obrnutu transkripciju i specifično amplifikaciju.Reagens sadrži Foregene jedinstvenu reverznu transkriptazu sa visokim afinitetom za RNK, kao i Hot D-Taq DNK polimerazu, dNTP, MgCl2 , reakcijski pufer, PCR optimizator i stabilizator, a može se koristiti zajedno sa puferom za lizu za brzo, lako i precizno detekciju uzorka, a ima karakteristike visoke osjetljivosti, jake specifičnosti i dobre stabilnosti.
Komplet je namenjen mikrosistemskoj lizi kultivisanih ćelija sa 96 jažica i ima dobru uniformnost i konzistenciju;komponente kompleta pružaju 96 reakcija lize, 96 reakcija reverzne transkripcije i 96×2 qPCR reakcija, koje mogu zadovoljiti ploču ćelija sa 96 jažica za jednokratnu upotrebu, izbjegavajući zagađenje uzrokovano ponovljenim otvaranjem, smrzavanjem i odmrzavanjem reagensa i degradacijom performansi reagensa.
Komponente kompleta
| Sastav kompleta ( 50 μL sistem za lizu/20 μLRT reakcioni sistem /20μL qPCR reakcijski sistem) | DRT-03011 | Napomena | |
| 96T | |||
| PartI | BufferCL | 5 mL | CellLiza |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Part II | DNKEraser | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Direktna qPCR mješavina-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX referentna boja | 400µL | ||
| RNase- BesplatnoddH2 O | 1,7mL |
| |
| Mgodišnji | 1 komad | 1 porcija | |
*: Reagens za lizu DNK Eraser je uključen u dio II kompleta;Komponente za lizu ćelija, RT i qPCR mogu se kupiti zasebno.
Karakteristike&prednosti
■Jednostavno i efikasno: sa Cell Direct RT tehnologijom, uzorci RNK se mogu dobiti za samo 7 minuta.
■ Potreba za uzorkom je mala, može se testirati samo 10 ćelija.
■ Visoka propusnost: može brzo detektovati RNK u ćelijama kultivisanim u pločama sa 384, 96, 24, 12, 6 jažica.
■ DNK Eraser može brzo ukloniti oslobođene genome, značajno smanjiti utjecaj na naknadne eksperimentalne rezultate.
■ Optimizovani RT i qPCR sistem čini dvostepenu RT-PCR reverznu transkripciju efikasnijom, a PCR specifičnijim i otpornijim na inhibitore RT-qPCR reakcije.
Aplikacija kompleta
Područje primjene: kultivirane ćelije.
- RNK oslobođena lizom uzorka: primjenjivo samo na RT-qPCR šablon ovog kompleta.
- Komplet se može koristiti u sljedeće svrhe: analiza genske ekspresije, provjera efekta utišavanja gena posredovanog siRNA, skrining lijekova, itd.
Skladištenje i rok trajanja
Dio I ovog kompleta treba čuvati na 4℃;Dio II treba čuvati na -20℃.
Foregene Protease Plus II treba čuvati na 4℃, ne smrzavati na -20 ℃.
Reagens 2×Direktni qPCR Mix-Taqman treba čuvati na -20℃po mraku;ako se često koristi, može se čuvati i na 4℃ za kratkotrajno skladištenje (iskoristite u roku od 10 dana).
Principi dizajna prajmera za PCR u realnom vremenu
Forward Primer i Reverse Primer
Za PCR u realnom vremenu, dizajn prajmera je veoma važan.Prajmeri se odnose na specifičnost i efikasnost PCR amplifikacije, a mogu se dizajnirati prema sljedećim principima:
- Dužina prajmera: 18-30bp.
- GC sadržaj: 40-60%.
- Tm vrijednost: Softver za dizajn prajmera, kao što je Primer 5, može dati Tm vrijednost prajmera.Vrijednosti Tm uzvodnih i nizvodnih prajmera trebaju biti što je moguće bliže.Može se koristiti i formula za proračun Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Prilikom izvođenja PCR-a, temperatura ispod Tm vrijednosti prajmera od 5 °C općenito se bira kao temperatura žarenja (odgovarajuće povećanje temperature žarenja može povećati specifičnost PCR reakcije).
- Prajmeri i PCR proizvodi:
- Dizajn prajmera PCR amplifikacije dužine proizvoda je poželjno 100-150bp.
- Dizajnerske prajmere u sekundarnoj strukturnoj oblasti šablona treba izbegavati što je više moguće.
- Izbjegavajte stvaranje 2 ili više komplementarnih baza između 3′ krajeva uzvodnih i nizvodnih prajmera.
- Prajmer 3′ terminalna baza ne može biti prisutna sa 3 dodatna uzastopna G ili C.
- Sami prajmeri ne mogu imati komplementarne strukture, inače će se formirati struktura ukosnice koja utiče na PCR amplifikaciju.
- ATCG bi trebao biti raspoređen što je moguće ravnomjernije u sekvenci prajmera, a 3′ terminalnu bazu treba izbjegavati kao T.
Dodatak1：Cell DirectRT-qPCR Kit component paket dodataka
1. Rešenje za lizu ćelija
| Rastvor za lizu ćelija | |||
| Komponente kompleta (sistem za lizu sa 24 jažice / bunar) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| PartI | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| PartII | DNK Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Komponente kompleta (20 μl reakcijski sistem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| ddH bez RNaze2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Komponente kompleta (20 μl reakcijski sistem) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX referentna boja | 40 μl | 200 μl |
| ddH bez RNaze2O | 1,7 ml | 10 ml |
Uputstva za upotrebu:
