Direct RT-qPCR komplet
Opis kompleta:
◮ Direktni RT-qPCR komplet, koristeći Foreasy reverznu transkriptazu i Foreasy HS Taq DNK polimerazu koju razvija Foregene, sa jedinstvenim reakcionim puferom, čini ovaj komplet sa jakom otpornošću i kompatibilnošću, i može direktno testirati reakciju koristeći Foregene Lysis sistem kao šablon.Ovaj komplet se može primijeniti za komplet za otkrivanje nukleinske kiseline COVID-19 i razvoj kompleta za otkrivanje nukleinskih kiselina drugih patogenih bakterija.
Opis
Direktni RT-qPCR komplet obezbeđuje odvojeno upakovani RT-qPCR pufer i visoko efikasan enzimmješavina (Taq、M-MLV、RI), što ga čini pogodnim za kreiranje back-end kompleta i sistemapodešavanje, unutar jednostavne provjere.
Specifikacije
500T, 50,000T
Komponente kompleta
| Sadržaj kompleta (20 μL reakcijski sistem) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Direktna smjesa enzima | 500 μL×1 | 50 mL×1 |
| 2× Direktni RT-qPCR pufer | 1 mL×5 | 500 mL×1 |
| Uputstvo | 1 | 1 |
Operativni koraci
Prije pripreme reagensa, sve reagense u kompletu treba odmrznuti na sobnoj temperaturi i lagano promiješati.
A: Pripremite se of šablon i reagens
1. Pripremite pripremljeni RNA šablon (preporučuje se upotreba kompleta serije Foregene Total RNA Isolation Kit za ekstrakciju i prečišćavanje RNA šablona) ili uzorka proizvoda za krekiranje (preporučuje se upotreba Foregene Lysis sistema), specifične prajmere (10 μM) i druge relevantne potrošne materijale, instrument.
2. Stavite 2× Direct RT-qPCR pufer, ddH2O bez RNase i 20× ROX referentnu boju (ako je'potrebno) u kutiji sa ledom, čineći da se prirodno tope i lagano miješaju.
B: Pripremite se of RT-qPCR sistem
Table 1 : Pripremite se of RT-qPCR ssistem
| Komponenta | Volume | Konačna koncentracija |
| 2× Direktni RT-qPCR pufer | 10 μL | 1× |
| Direktna smjesa enzima | 1μL | |
| Forward Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Sonda (4 μM) | 1μL | 200nM |
| Šablon (RNA ili lizat) | X μL | |
| 20×ROX referentna boja | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Total Volume | 20μL |
C: Set the RT-qPCR reakcija program
Table 2 : RT-qPCR reaction program postavljanje (za primjer: dva-korak metoda)
| Korak | Temperatura | Vrijeme | Ciklusi | Sadržaj | |
| 1 | 50℃ | 15 min | 1* | 1 | Reverzna transkripcija |
| 2 | 95℃ | 1 min | 1 | Pre-denaturacija | |
| 3 | 95℃ | 10 sek | 40-45 | Denaturacija | |
| 60℃ | 30 sekundi 2* | Anneal/Extension | |||
Skladištenje i rok trajanja
-Komplet treba čuvati na -20± 5℃.Rok važenja je 12 mjeseci.
-Izbjegavajte ponavljanje ciklusa zamrzavanja-odmrzavanja (<5 ciklusa).
