Direct RT-qPCR komplet II
Opis kompleta:
◮Direktni RT-qPCR komplet, koristeći Foreasy reverznu transkriptazu i Foreasy HS Taq DNK polimerazu koju razvija Foregene, sa jedinstvenim reakcionim puferom, čini ovaj komplet sa jakom otpornošću i kompatibilnošću, i može direktno testirati reakciju koristeći Foregene Lysis sistem kao šablon.Ovaj komplet se može primijeniti za komplet za otkrivanje nukleinske kiseline COVID-19 i razvoj kompleta za otkrivanje nukleinskih kiselina drugih patogenih bakterija.
Opis
Direct RT-qPCR komplet pruža odvojeno upakovani RT-qPCR pufer, visoko efikasnu Foreasy HS Taq DNK polimerazui predvidljiva reverzna transkriptaza (MMLV),čineći ga pogodnim za kreiranje back-end kompleta i podešavanje sistema, uz jednostavnu verifikaciju.
Direktni RT-qPCR komplet, koristeći Foreasy reverznu transkriptazu i Foreasy HS Taq DNK polimerazu koju razvija Foregene, sa jedinstvenim reakcionim puferom, čini ovaj komplet sa jakom otpornošću i kompatibilnošću, i može direktno testirati reakciju koristeći Foregene Lysis sistem kao šablon.Ovaj komplet se može primijeniti za komplet za otkrivanje nukleinske kiseline COVID-19 i razvoj kompleta za otkrivanje nukleinskih kiselina drugih patogenih bakterija.
Ovaj komplet može direktno biti komponenta IVD proizvoda, koristeći se lako i brzo.Potrebna je samo laka verifikacija, bez ponovnog razvoja.
Specifikacije
500T, 50,000T
Komponente kompleta
| Sadržaj kompleta (20 μL reakcijski sistem) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Foreasy Reverse Transscriptase (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 mL×5 |
| Foreasy HS Taq DNK polimeraza (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 mL×10 |
| 2× Direktna RT-qPCRBuffer | 1 mL ×5 | 500 mL ×1 |
| Uputstvo | 1 | 1 |
Operativni koraci
O: Pripremite šablon i reagens
1. Pripremite pripremljeni RNA šablon (preporučuje se upotreba kompleta serije Foregene Total RNA Isolation Kit za ekstrakciju i prečišćavanje RNA šablona) ili uzorka proizvoda za krekiranje (preporučuje se upotreba Foregene Lysis sistema), specifične prajmere (10 μM) i druge relevantne potrošne materijale, instrument.
2. Stavite 2× Direct RT-qPCR pufer, ddH2O bez RNase i 20× ROX referentnu boju (ako je potrebno) u kutiju sa ledom, čineći da se prirodno tope i lagano pomiješaju.
B: Pripremite RT-qPCR sistem
Dobijte polovinu zapremine reakcionog pufera reakcionog sistema (na primer, ako je zapremina sistema 20 μL, potrebno je da dobijete 10 μL 2× Direct RT-qPCR pufera). Zaodgovarajuću količinu enzima, predlažemo toM-MLV: 10-30 U/20 μL reakcijski sistem,TaqDNK polimeraza：1-2 U/20 μL reakcijski sistemovo je naš prijedlog, trebali biste ga testirati i prilagoditi), dodajte RNA šablon, specifične prajmere i sonde i dodajte ddH bez RNaze2O do 20 μL.Specifična priprema RT-qPCR reakcijskog sistema može se pogledati u sljedećoj tabeli 1.
Tabela 1: Priprema RT-qPCR sistema
| Komponenta | Volume | Konačna koncentracija |
| 2× Direktni RT-qPCR pufer | 10 μL | 1× |
| Predvidljiva reverzna transkriptaza (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNK polimeraza | 1-2 U | |
| Forward Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Sonda (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Šablon (RNA ili lizat) | X μL | |
| 20× ROX referentna boja | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Total Volume | 20 μL |
Napomena: Forward Primer i Reverse Primer su specifični prajmeri ciljnog gena.Sistem qPCR-a se mogao prilagoditi praktičnim eksperimentalnim i PCR modelima.Preporučujemo 400nM za konačnu koncentraciju većine prajmera.Podesite volumen specifičnih prajmera i sondi prema pripremljenoj koncentraciji i preporučenoj konačnoj koncentraciji, molim.
1*: Odaberite odgovarajuću konačnu koncentraciju ROX referentne boje prema različitim kvantitativnim PCR instrumentima.Optimalna koncentracija ROX referentne boje uobičajenih kvantitativnih PCR instrumenata prikazana je u tabeli koja slijedi:
| Kvantitativni PCR instrumenti | Konačna koncentracija ROX referentne boje |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One,itd. | 1× (na primjer, dodajte 1μl 20×ROX referentne boje u 20 μL reakcijski sistem) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P i Mx4000, itd. | 0,5× (na primjer, dodajte 0,5 μl 20×ROX referentne boje u 20 μL reakcijskog sistema) |
| Roche PCR instrument, Bio-Rad PCR instrument, Eppendorf kvantitativni PCR instrument, itd. | Bez ROX referentne boje |
Skladištenje i rok trajanja
Komplet treba čuvati na -20 ± 5℃.Odmah ga treba čuvati u termostatskom frižideru na -20℃.Rok važenja je 2 godine ako se čuva u odgovarajućem stanju.
