Bukalni bris/FTA kartica Komplet za izolaciju DNK Komplet za ekstrakciju ili pročišćavanje genomske DNK iz bukalnih briseva
Opis kompleta:
Brzo pročistite visokokvalitetni genomski DNK iz uzoraka bukalnog brisa/FTA kartice.
◮Nema kontaminacije RNase:Kolona samo za DNK koju obezbeđuje komplet omogućava uklanjanje RNK iz genomske DNK bez dodavanja RNKaze tokom eksperimenta, sprečavajući da laboratorija bude kontaminirana egzogenom RNKazom.
◮Brza brzina:Foregene proteaza ima veću aktivnost od sličnih proteaza i brzo probavlja uzorke tkiva;operacija je jednostavna, a operacija ekstrakcije genomske DNK može se završiti u roku od 20-80 minuta.
◮Pogodno:Centrifugiranje se izvodi na sobnoj temperaturi i nema potrebe za niskotemperaturnim centrifugiranjem na 4°C ili precipitacijom DNK etanolom.
◮Sigurnost:Nije potrebna ekstrakcija organskog reagensa.
◮Visoka kvaliteta:Ekstrahirana genomska DNK ima velike fragmente, nema RNK, nema RNKazu i izuzetno nizak sadržaj jona, što može zadovoljiti zahtjeve različitih eksperimenata.
◮Sistem mikroeluiranja:Može povećati koncentraciju genomske DNK, što je pogodno za nizvodno otkrivanje ili eksperiment.
Opis
Ovaj komplet pruža efikasnu i brzu metodu za dobijanje genomske DNK visoke koncentracije iz bukalnih briseva i FTA kartice (krvnih mrlja).Koristeći našu kompaniju'Jedinstvena silika membrana sa spin kolonom i formulom koja sadrži samo DNK, u kombinaciji sa Foregene proteazom, visoko koncentracijska, visokokvalitetna genomska DNK može se ekstrahovati za 80 minuta.Posebno dizajnirana mala kolona za pročišćavanje vezuje genomsku DNK, a DNK se može eluirati s malom količinom (15μl) elucijski sistem za povećanje koncentracije dobijene genomske DNK, što je pogodno za nizvodnu detekciju ili eksperiment.Komplet može obraditi jedan ili više uzoraka odjednom, a proces pročišćavanja ne zahtijeva ekstrakciju organskih tvari kao što su fenol, kloroform i dugotrajno taloženje izopropanola ili etanola, a operacija je jednostavna i štedi vrijeme.
Specifikacije
50 Preps
Komponente kompleta
| Buffer ST1 |
| Buffer ST2 |
| Linearni akrilamid |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Foregene Protease |
| Kolona samo za DNK |
| Instrukcije |
Karakteristike&prednosti
-Bez kontaminacije RNase: Kolona samo za DNK koju obezbeđuje komplet omogućava uklanjanje RNK iz genomske DNK bez dodavanja RNaze tokom eksperimenta, izbegavajući da laboratorija bude kontaminirana egzogenom RNKazom.
-Brza brzina: Foregene proteaza ima veću aktivnost od sličnih proteaza, brzo probavlja uzorke;jednostavan rad.
-Pogodno: centrifugiranje se izvodi na sobnoj temperaturi i nema potrebe za niskotemperaturnim centrifugiranjem na 4°C ili taloženjem DNK etanolom.
-Sigurnost: Nije potrebna ekstrakcija organskog reagensa.
-Visoka kvaliteta: ekstrahovana genomska DNK ima velike fragmente, bez RNK, bez RNKaze i izuzetno niskog sadržaja jona, što može zadovoljiti zahtjeve različitih eksperimenata.
-Mikro-elucijski sistem: Može povećati koncentraciju genomske DNK, što je pogodno za nizvodno otkrivanje ili eksperiment.
Aplikacija kompleta
Pogodan je za pročišćavanje genomske DNK iz sljedećih uzoraka: brisevi usne šupljine, FTA kartica (mrlje krvi).
Skladištenje i rok trajanja
-Ovaj komplet se može čuvati 12 meseci u suvim uslovima na sobnoj temperaturi (15-25°C);ako je potrebno duže čuvanje, može se čuvati na 2-8°C.
Napomena: Ako se čuva na niskoj temperaturi, rastvor je sklon taloženju.Prije upotrebe, obavezno stavite otopinu u komplet na sobnu temperaturu neko vrijeme.Ako je potrebno, zagrijte ga u vodenom kupatilu na 37°C 10 minuta da se talog otopi, a prije upotrebe promiješajte.
-Foregene Protease rastvor ima jedinstvenu formulu, koja je aktivna kada se dugo čuva na sobnoj temperaturi (3 meseca);njegova aktivnost i stabilnost će biti bolja kada se čuva na 4°C, pa se preporučuje da ga čuvate na 4°C, ne zaboravite da ga ne čuvate na -20°C.
Kolona za prečišćavanje je začepljena
U ovom kompletu, u operaciji ekstrakcije genomske DNK, kolona za pročišćavanje se direktno adsorbira na mješavinu enzimske lize uzorka bez koraka centrifugiranja, a kolona za prečišćavanje može biti blokirana zbog nepotpune enzimizacije i visokog viskoziteta uzorka.
Sljedeći mogući uzroci su sljedeći:
1. Nepotpuna enzimska probava uzoraka tkiva.
Preporuka: Vrijeme obrade uzorka Foregene Protease može se na odgovarajući način produžiti ili se supernatant može uzeti nakon centrifugiranja na 12.000 rpm (~13.400 × g) u trajanju od 5 minuta.
2. Prekomjerna upotreba uzoraka tkiva ili velikih tkiva.
Preporuka: Najbolje je da ne prelazite 1 bukalni bris u uzorku;ako je uzorak prevelik, povećajte dozu pufera ST1, foregen proteaze, pufera ST2 u skladu s tim.
3. Viskoznost uzorka je previsoka.
Preporuka: Uzorci se mogu na odgovarajući način razrijediti sa 10 mM Tris-HCl prije ekstrakcije genomske DNK.
4. Fragmenti krvne karte su usisani.
Preporuka: Prolazno vrijeme centrifugiranja koraka 6 genomske ekstrakcije krvne mrlje (FTA kartica) može se na odgovarajući način produžiti.
Nizak prinos ili bez DNK
Često postoji niz faktora koji utiču na prinos genomske DNK, uključujući porijeklo uzorka, uslove skladištenja uzorka, pripremu uzorka, manipulaciju itd.
Genomska DNK se ne može dobiti tokom ekstrakcije
Mogući uzroci su sljedeći:
1. Nepravilno čuvanje uzoraka ili predugo skladištenje dovodi do degradacije genomske DNK.
Preporuka: Oralne briseve poželjno je uzimati svježe, a nije preporučljivo koristiti sačuvane briseve za operacije ekstrakcije genomske DNK;uzorci krvnih mrlja trebaju osigurati da je kvalitet kvalifikovan i da vrijeme skladištenja ne bi trebalo biti predugo.
2. Premala upotreba tkiva može dovesti do izostanka ekstrakcije odgovarajuće genomske DNK.
Preporuka: Slijedite upute za uzorkovanje bukalnog brisa u uputstvu za operaciju i obrišite što je više moguće kako bi se dovoljno ćelija moglo pričvrstiti na oralni bris za ekstrakciju genomske DNK;za vađenje uzorka krvne mrlje, područje rezanja krvne mrlje može se na odgovarajući način povećati.
3. Foregene proteaza je nepropisno očuvana, što dovodi do smanjenja njene aktivnosti ili inaktivacije.
Preporuka: Potvrdite uslove skladištenja Foregene proteaze ili je zamenite novom Foregene proteazom za enzimsku reakciju.
4. Nepravilno očuvanje kompleta ili vrijeme skladištenja je predugo, što rezultira kvarom nekih komponenti u kompletu.
Preporuka: Kupite novi komplet za izolaciju DNK bukalnog brisa za povezane procedure.
5. Pufer WB ne dodaje apsolutni etanol.
Preporuka: Potvrdite da pufer WB dodaje tačnu količinu apsolutnog etanola.
6. Eluent nije pravilno dodat silikonskom filmu.
Preporuka: U sredinu silikonske membrane dodajte kapi eluenta prethodno zagrijane na 65 °C i ostavite na sobnoj temperaturi 5 minuta kako biste povećali efikasnost eluiranja.
Izolovana genomska DNK niskog prinosa
Sljedeći mogući uzroci su sljedeći:
1. Nepravilno čuvanje uzoraka ili predugo skladištenje dovodi do degradacije genomske DNK.
Preporuka: Poželjno je da se brisevi usne šupljine uzimaju svježe, a konzervirani brisevi se ne smiju koristiti za ekstrakciju genomske DNK.
2. Ako je količina uzorka tkiva premala, sadržaj ekstrahirane genomske DNK će biti manji.
Preporuka: Slijedite upute za uzorkovanje oralnog brisa u uputstvu za upotrebu, obrišite što je više puta moguće kako bi se dovoljno ćelija moglo pričvrstiti na oralni bris za ekstrakciju genomske DNK.
3. Foregene proteaza je nepropisno očuvana, što dovodi do smanjenja njene aktivnosti ili inaktivacije.
Preporuka: Potvrdite uslove skladištenja Foregene proteaze ili je zamenite novom Foregene proteazom za enzimsku reakciju.
4. Problemi sa eluentom.
Preporuka: Koristite pufer EB za eluiranje;ako koristite ddH2O ili drugi eluenti, potvrdite da je pH eluata između 7,0-8,5.
5. Eluat nije pravilno dodan kap po kap.
Preporuka: Dodajte kapi eluenta u sredinu silikonske membrane i ostavite na sobnoj temperaturi 5 minuta da povećate efikasnost eluiranja.
6. Tečnost za eluiranje se akumulira premalo.
Preporuka: Koristite eluent za eluiranje genomske DNK prema uputstvima, najmanje ne manje od 15 μl.
Izolovana genomska DNK niske čistoće
Niska čistoća genomske DNK može dovesti do neuspjeha ili nezadovoljavajućih rezultata nizvodnih eksperimenata, kao što su: enzimi se ne mogu otvoriti, PCR ne može dobiti genski fragment od interesa, itd.
Mogući uzroci su sljedeći:
1. Heteroproteinsko zagađenje, RNA zagađenje.
Analiza: Kolona za prečišćavanje nije isprana puferom PW;kolona za pročišćavanje pufera PW nije isprana pravilnom centrifugalnom brzinom.
Preporuka: Uverite se da nema taloženja u supernatantu pre dodavanja etanola;obavezno operite kolonu za pročišćavanje prema uputama i ovaj korak se ne može izostaviti.
2. Zagađenje ionima nečistoćama.
Analiza: Kolona za pročišćavanje pufera WB je izostavljena ili je isprana samo jednom, što je rezultiralo zaostalom ionskom kontaminacijom.
Preporuka: Obavezno isperite pufer WB 2 puta prema uputstvima kako biste uklonili zaostale jone što je više moguće.
3. Kontaminacija RNA enzima.
Analiza: Strane RNaze su dodane u pufer;Operacija ispiranja pufera PW bila je netačna, što je rezultiralo ostacima RNase, što je uticalo na nizvodne eksperimentalne operacije RNK, kao što je in vitro transkripcija.
Preporuka: Kompleti za izolaciju nukleinske kiseline Foregene serije mogu ukloniti RNK bez dodatnog dodavanja RNaze, tako da komplet za izolaciju DNK bukalnog brisa/FTA kartice ne mora da dodaje RNazu;obavezno slijedite upute za kolonu za pročišćavanje pranja Buffer PW i ovaj korak se ne može izostaviti.
4. Ostatak etanola.
Analiza: Pufer WB nije izvršio centrifugiranje prazne epruvete nakon pranja kolone za prečišćavanje.
Preporuka: Izvršite ispravnu operaciju centrifugiranja prazne epruvete prema uputstvima.
5. Zagađenje drugim nečistoćama.
Analiza: Sačuvani uzorci ili specijalni uzorci nisu prethodno tretirani.
Preporuka: Temeljito prethodno obradite uzorak prema uputstvima.
