Nizak omjer A260/A230 obično je uzrokovan nečistoćama s maksimalnom talasnom dužinom apsorpcije na 230nm.Pogledajmo šta ove nečistoće uključuju:

• Uobičajeni zagađivači	Talasna dužina apsorpcije	Efekat odnosa
  Protein	~230nm i 280nm	Istovremeno smanjenje A260/A 280i A260/A 280omjeri
  Gvanidin sol	220-240 nm	Smanjite A260/A 280odnos
  fenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm i 270nm	Smanjite A260/A 280odnos
  EDTA	~230nm	Smanjite A260/A 280odnos
  Etanol	230-240 nm	Smanjite A260/A 280odnos

 
 
 
Talasna dužina apsorpcije i vrijednost kontrasta uobičajenih zagađivača

Pkontaminacija roteinom
Zagađenje proteinima se može smatrati najčešćim zagađenjem u procesu ekstrakcije nukleinske kiseline.Protein postoji između gornje vodene faze i donjeorganskifaza .Zagađenje će smanjiti omjer A260/A280 i A260/A230 u isto vrijeme, a odnos A260/A230 će se očiglednije promijeniti od omjera A260/A280.
Tokom naknadnihreverzna transkripcijaor qPCR reakcije, proteinski ostaci mogu inhibirati ili ometati funkciju enzima.Najbolji način da se izbjegne kontaminacija proteinima je da se pri aspiraciji supernatanta ima na umu princip „radije manje nego više, mala količina mnogo puta“.

2. Zagađenje gvanidinijumom
hidrohlorid (GuHCl) i gvanidin tiocijanat (GTC) imaju efekat denaturacije proteina, koji mogu brzo uništiti ćelijske membrane tokom procesa ekstrakcije nukleinske kiseline, uzrokujući denaturaciju proteina i precipitaciju.Talasna dužina apsorpcije GuHCl i GTC je između 220-240 nm, azaostala gvanidinijumova so će smanjiti odnos A260/A230.Iako će zaostala sol gvanidinijuma smanjiti omjer,uticaj na nizvodne eksperimente je zapravo zanemarljiv.

3. Trizol kontaminacija
Glavna komponenta Trizola je fenol.Glavna funkcija fenola je da lizira ćelije i oslobađa proteine ​​i supstance nukleinske kiseline u ćelijama.Iako fenol može efikasno denaturirati proteine, on ne može u potpunosti inhibirati aktivnost RNKaze.Stoga se TRIzolu dodaju 8-hidroksihinolin, gvanidin izotiocijanat, β-merkaptoetanol, itd. kako bi se inhibirala endogena i egzogena RNKaza.
Prilikom ekstrakcije stanične RNK, Trizol može brzo lizirati ćelije i inhibirati oslobađanje nukleaze iz ćelija, a rezidualni Trizol će značajno smanjiti omjer A260/A230.
Metoda obrade: Prilikom centrifugiranja treba imati na umu da je fenol u Trizolu lako rastvorljiv u vodenoj fazi pod uslovima od 4° i sobne temperature.

4. Ostatak etanola
Etanol se koristi u konačnom procesu za taloženje DNK dok se otapaju ioni soli koji se mogu vezati za DNK.Talasna dužina apsorpcije je najvećaapsorpcijski vrh odetanol je također na 230-240 nm, štoće također smanjiti omjer A260/A230.
Metoda izbjegavanja ostatka etanola može se ponoviti dva puta tokom završnog eluiranja, duvanjem unapadvije minute kako bi etanol potpuno ispario prije dodavanja pufera za eluiranje.
Međutim, treba znati da je omjer samo indeks evaluacije kvaliteta RNK.Ako su gore navedene operacije striktno regulirane, odstupanje između omjera i standardnog raspona neće imati veliki utjecaj na nizvodne eksperimente.
Srodni proizvodi:
Komplet za izolaciju ukupne RNK životinja
Komplet za izolaciju ukupne RNK biljaka
Komplet za izolaciju ukupne RNK ćelija
Komplet za izolaciju ukupne RNK biljaka Plus