FAQ je zaKomplet za izolaciju ukupne RNK životinja

Sljedeća analiza problema na koje možete naićiekstrakcija RNK životinjskog tkiva/ćelije will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNK se ne ekstrahuje ili je prinos RNK nizak

Često postoji niz faktora koji utiču na efikasnost oporavka, kao što su: sadržaj RNK uzorka tkiva, način rada, zapremina eluiranja, itd.

1. Ledeno kupatilo ili kriogeno (4 °C) centrifugiranje je izvedeno tokom rada.

Preporuka: Radite na sobnoj temperaturi (15-25°C) tokom čitavog procesa, nemojte kupati u ledenoj kupki i centrifugirati na niskim temperaturama.

2. Nepravilno očuvanje uzorka ili prekomjerno vrijeme skladištenja uzorka.

Preporuka: Čuvajte uzorke na -80 °C ili zamrznite u tekućem dušiku i izbjegavajte ponovnu upotrebu zamrzavanja-odmrzavanja;pokušajte koristiti svježe tkivo ili kultivirane stanice za ekstrakciju RNK.

3. Nedovoljna liza uzorka.

Preporuka: Kada homogenizujete tkivo, uverite se da je tkivo dovoljno homogeno i da su ćelije tkiva dovoljno podeljene da objasni oslobađanje RNK.

4. Eluent nije dodan ispravno.

Preporuka: Potvrdite da je ddH bez RNase₂O se dodaje u kapima u sredinu membrane kolone za prečišćavanje.

5. Tačan volumen apsolutnog etanola nije dodat u pufer RL2 ili pufer RW2.

Preporuka: Slijedite upute, dodajte tačnu količinu apsolutnog etanola u pufer RL2 i pufer RW2 i dobro promiješajte prije upotrebe kompleta.

6. Doziranje uzorka tkiva nije prikladno.

Preporuka: Koristite 10-20 mg tkiva ili (1-5) × 10⁶ćelija po 500 μl pufera RL1, jer prekomjerna upotreba tkiva može rezultirati smanjenom ekstrakcijom RNK.

7. Nepravilna zapremina eluiranja ili nepotpuno eluiranje.

Preporuka: Volumen eluiranja kolone za prečišćavanje je 50-200 μl;ako efekat eluiranja nije zadovoljavajući, preporučuje se produžiti vrijeme postavljanja na sobnu temperaturu nakon dodavanja prethodno zagrijanog ddH bez RNase₂O, npr. 5-10 min.

8. Kolona za prečišćavanje ima ostatak etanola nakon ispiranja pufera RW2.

Preporuka: Ako postoji ostatak etanola nakon ispiranja pufera RW2, centrifugiranja prazne epruvete 1 min, vrijeme za operaciju centrifugiranja prazne epruvete može se povećati na 2 minute ili se kolona za pročišćavanje može staviti na sobnu temperaturu na 5 minuta kako bi se adekvatno uklonio preostali etanol.

Prečišćena RNK se razgrađuje

Kvalitet pročišćene RNK povezan je s faktorima kao što su očuvanje uzorka, kontaminacija RNK-azom i manipulacija, itd.

1. Uzorci tkiva se ne čuvaju na vrijeme.

Preporuka: Ako se uzorci tkiva ili ćelije ne koriste na vrijeme nakon sakupljanja, odmah ih kriokonzervirati na -80 °C ili tečnom dušiku.Za ekstrakciju RNK koristite novo uzeto tkivo ili uzorak ćelije kad god je to moguće.

2. Ponovljeno zamrzavanje-odmrzavanje uzoraka tkiva.

Preporuka: Prilikom pohranjivanja uzoraka tkiva, najbolje ih je izrezati na male komadiće radi očuvanja, a prilikom upotrebe ukloniti jedan od komada kako bi se izbjeglo ponovno zamrzavanje-odmrzavanje uzorka i degradacija RNK.

3. RNase se uvodi ili ne nosi jednokratne rukavice, maske i sl. tokom operacije.

Preporuka: Eksperimente ekstrakcije RNK najbolje je izvoditi u odvojenim prostorijama za manipulaciju RNK, a sto se čisti prije eksperimenta.

Nosite jednokratne rukavice i maske tokom eksperimenta kako biste smanjili degradaciju RNK uzrokovanu uvođenjem RNase.

4. Reagensi su kontaminirani RNase tokom upotrebe.

Preporuka: Zamijenite novim kompletom za izolaciju ukupne RNA životinja za povezane eksperimente.

5. Centrifugalne epruvete, vrhovi itd. koji se koriste u RNA manipulaciji su kontaminirani RNase.

Preporuka: Potvrdite da su centrifugalne epruvete, vrhovi, pipete, itd. koji se koriste za ekstrakciju RNK, sve bez RNKaze.

Pročišćena dobijena RNK utiče na nizvodne eksperimente

RNK pročišćena kolonom za pročišćavanje, ako je ioni soli, sadržaj proteina prevelik, utjecat će na nizvodni eksperiment, kao što su: reverzna transkripcija,Northern Blot et al.

1. Eluirana RNK ima ostatke jona soli.

Preporuka: Potvrdite da je tačna zapremina etanola dodata puferu RW2 i izvršite 2 ispiranja kolone za prečišćavanje pri centrifugalnoj brzini naznačenoj za rad;ako ima ostataka jona soli, ostavite kolonu za prečišćavanje u puferu RW2 5 minuta na sobnoj temperaturi i izvršite centrifugiranje kako biste maksimalno uklonili kontaminaciju soli.

2. Ostatak etanola u eluiranoj RNK.

Preporuka: Potvrdite da nakon ispiranja pufera RW2 izvršite operaciju centrifugiranja prazne epruvete pri brzini centrifugiranja naznačenoj za rad, povećajte vrijeme operacije centrifugiranja prazne epruvete na 2 minute ako još ima ostataka etanola ili ostavite na sobnoj temperaturi 5 minuta nakon centrifugiranja prazne epruvete kako biste maksimizirali uklanjanje resorpcije.

Izolacija tipova uzoraka nulceinske kiseline

Foregene-ovi kompleti za izolaciju RNK mogu dobiti potpunu izolaciju/ekstrakciju RNK iz sljedećih izvora uzoraka: životinjsko tkivo, biljka, ćelije, virus, krv, itd.

Kako da čuvam komplet

Čuvanje na sobnoj temperaturi 24 mjeseca.