Antitela, takođe nazvana imunoglobulini (Ig), su glikoproteini koji se specifično vezuju za antigene.
 
Konvencionalni preparat antitijela proizvodi se imunizacijom životinja i prikupljanjem antiseruma.Stoga, antiserum obično sadrži antitijela protiv drugih nepovezanih antigena i drugih proteinskih komponenti u serumu.Opći molekuli antigena uglavnom sadrže više različitih epitopa, tako da su konvencionalna antitijela također mješavina antitijela protiv više različitih epitopa.Čak su i konvencionalna serumska antitijela usmjerena protiv istog epitopa i dalje sastavljena od heterogenih antitijela proizvedenih od strane različitih klonova B ćelija.Stoga se konvencionalna serumska antitijela nazivaju i poliklonska antitijela, ili skraćeno poliklonska antitijela.
 
Monoklonsko antitijelo (monoklonsko antitijelo) je visoko uniformno antitijelo proizvedeno od strane jednog klona B ćelije i usmjereno samo protiv specifičnog epitopa.Obično se priprema hibridomskom tehnologijom—tehnologija hibridomskih antitijela zasnovana je na tehnologiji fuzije ćelija, kombinujući B ćelije sa sposobnošću da luče specifična antitela i ćelije mijeloma sa beskonačnim kapacitetom rasta u hibridome B ćelija.Ova ćelija hibridoma ima karakteristike roditeljske ćelije.Može se neograničeno i besmrtno razmnožavati in vitro poput ćelija mijeloma, a može sintetizirati i lučiti specifična antitijela poput limfocita slezene.Kloniranjem se može dobiti monoklonska linija izvedena iz jedne ćelije hibridoma, odnosno hibridoma stanična linija.Antitijela koja proizvodi su visoko homogena antitijela protiv iste antigenske determinante, odnosno monoklonskih antitijela.
 
Antitijela postoje kao jedan ili više monomera u obliku slova Y (tj. monoklonska antitijela ili poliklonska antitijela).Svaki monomer u obliku slova Y sastoji se od 4 polipeptidna lanca, uključujući dva identična teška lanca i dva identična laka lanca.Laki i teški lanci nazivaju se prema njihovoj molekularnoj težini.Vrh strukture u obliku slova Y je varijabilna regija, koja je mjesto vezivanja antigena.(Izvod iz Detai koncepta bio-monoklonalnih antitijela)
 
Struktura antitijela
Teški lanac
Postoji pet tipova teških Ig lanaca sisara, nazvanih grčkim slovima α, δ, ε, γ i μ.Odgovarajuća antitela se nazivaju IgA, IgD, IgE, IgG i IgM.Različiti teški lanci razlikuju se po veličini i sastavu.α i γ sadrže približno 450 aminokiselina, dok μ i ε sadrže približno 550 aminokiselina.
Svaki teški lanac ima dva regiona: konstantni region i varijabilni region.Sva antitijela istog tipa imaju istu konstantnu regiju, ali postoje razlike između antitijela različitih tipova.Konstantni regioni teških lanaca γ, α i δ se sastoje od tri Ig domena u tandemu, sa zglobnim regionom za povećanje njegove fleksibilnosti;konstantni regioni teških lanaca μ i ε se sastoje od 4 Ig domena.Varijabilni region teškog lanca antitela koje proizvode različite B ćelije je različit, ali varijabilni region antitela proizveden od strane iste B ćelije ili ćelijskog klona je isti, a varijabilni region svakog teškog lanca je dugačak oko 110 aminokiselina., I formiraju jednu Ig domenu.
 
Laki lanac
Postoje samo dva tipa lakih lanaca kod sisara: lambda tip i kapa tip.Svaki laki lanac ima dva povezana domena: konstantni region i varijabilni region.Dužina lakog lanca je oko 211~217 aminokiselina.Dva laka lanca sadržana u svakom antitelu su uvek ista.Za sisare, laki lanac u svakom antitelu ima samo jedan tip: kapa ili lambda.Kod nekih nižih kralježnjaka, kao što su hrskavice (ribe hrskavice) i koštane ribe, nalaze se i druge vrste lakih lanaca kao što je tip jota (jota).
 
Fab i Fc segmenti
Fc segment se može direktno kombinovati sa enzimima ili fluorescentnim bojama za obeležavanje antitela.To je dio gdje se antitelo zakiva na ploči tokom ELISA procesa, a takođe je i deo gde se drugo antitelo prepoznaje i vezuje u imunoprecipitaciji, imunoblotingu i imunohistohemiji.Antitijela se mogu hidrolizirati u dva F(ab) segmenta i jedan Fc segment pomoću proteolitičkih enzima kao što je papain, ili se mogu razbiti iz šarke pepsinom i hidrolizirati u jedan F(ab)2 segment i jedan Fc segment.Fragmenti IgG antitijela su ponekad vrlo korisni.Zbog nedostatka Fc segmenta, F(ab) segment neće precipitirati sa antigenom, niti će ga imune ćelije uhvatiti u in vivo studijama.Zbog malih molekularnih fragmenata i nedostatka funkcije unakrsnog povezivanja (zbog nedostatka Fc segmenta), Fab segment se obično koristi za radioobilježavanje u funkcionalnim studijama, a Fc segment se uglavnom koristi kao blokator u histohemijskom bojenju.
 
Promjenljive i konstantne regije
Varijabilni region (V region) nalazi se na 1/5 ili 1/4 (sadrži oko 118 aminokiselinskih ostataka) H lanca blizu N-kraja i 1/2 (sadrži oko 108-111 aminokiselinskih ostataka) blizu N-kraja L lanca.Svaki V region ima peptidni prsten formiran disulfidnim vezama unutar lanca, a svaki peptidni prsten sadrži otprilike 67 do 75 aminokiselinskih ostataka.Sastav i raspored aminokiselina u V regiji određuju specifičnost vezivanja antigena antitela.Zbog stalno promjenjivih tipova i redoslijeda aminokiselina u V regiji, mogu se formirati mnoge vrste antitijela s različitim specifičnostima vezanja antigena.V regioni L lanca i H lanca nazivaju se VL i VH, respektivno.U VL i VH, sastav i sekvenca aminokiselina nekih lokalnih regija imaju veći stepen varijacije.Ove regije se nazivaju hipervarijabilne regije (HVR).Sastav aminokiselina i raspored dijelova koji nisu HVR u V regiji su relativno konzervativni, što se naziva okvirna regija.Postoje tri hipervarijabilne regije u VL, koje se obično nalaze na aminokiselinskim ostacima 24 do 34 i 89 do 97 respektivno.Tri HVR-a VL i VH nazivaju se HVR1, HVR2 i HVR3, respektivno.Istraživanjem i analizom difrakcije rendgenskih kristala dokazano je da je hipervarijabilni region zaista mesto na kome se vezuje antigen antitela, pa se naziva region koji određuje komplementarnost (CDR).HVR1, HVR2 i HVR3 VL i VH mogu se nazvati CDR1, CDR2 i CDR3 respektivno.Generalno, CDR3 ima viši stepen hipervarijabilnosti.Hipervarijabilna regija je također glavna lokacija gdje postoje idiotipske determinante Ig molekula.U većini slučajeva, H lanac igra važniju ulogu u vezivanju za antigen.
Konstantna regija (C regija)nalazi se na 3/4 ili 4/5 (otprilike od amino kiseline 119 do C terminala) H lanca blizu C kraja i 1/2 (sadrži oko 105 aminokiselinskih ostataka) blizu C kraja L lanca.Svaki funkcionalni region H lanca sadrži oko 110 aminokiselinskih ostataka, i sadrži peptidni prsten sastavljen od 50-60 aminokiselinskih ostataka povezanih disulfidnim vezama.Sastav i raspored aminokiselina ove regije su relativno konstantni u istom životinjskom Ig izotip L lanca i istom tipu H lanca.Isto, može se samo specifično vezati za odgovarajući antigen, ali je struktura njegovog C regiona ista, odnosno ima istu antigenost.Konjsko anti-humano IgG sekundarno antitijelo (ili anti-antitijelo) može se kombinirati sa dva A kombinacija antitijela (IgG) protiv različitih egzotoksina se javlja.Ovo je važna osnova za pripremu sekundarnih antitijela i primjenu fluoresceina, izotopa, enzima i drugih označenih antitijela.
 
 
Srodni proizvodi:
Cell Direct RT-qPCR komplet