PCR metode i kontaminacija aerosolom nukleinskom kiselinom u laboratorijama za testiranje nukleinskih kiselina su kao dvije strane medalje.Možemo samo birati hoćemo li ga imati ili ne, ali ne možemo birati hoćemo li ga ili potrošiti.

1. Skrining odstranjivača DNK

Da bi se postiglo prostorno uklanjanje aerosolne kontaminacije nukleinskom kiselinom, prvo je potrebno izdvojiti sredstva za uklanjanje DNK koji mogu ukloniti nukleinske kiseline u tekućem stanju.Zato što nema mnogo sredstava za uklanjanje DNK koji stvarno rade.Za eksperimentalnu metodu pogledajte: Odstranjivač DNK ne može biti "tajni kutak" laboratorije!

U ovom eksperimentu, 100 kopija/μL (CT približno 31) ASFV plazmida i sredstva za uklanjanje DNK kvantificiranih digitalnim PCR-om pomiješano je u jednakim količinama, a zatim reagovano na sobnoj temperaturi 10 min, 20 min i 30 min.Nakon ekstrakcije nukleinske kiseline, izvršena je qPCR amplifikacija.Upoređena je pozitivna kontrola pomiješana sa plazmidom i vodom.Budući da eksperiment nije završen u isto vrijeme, može doći do određenog odstupanja između rezultata, ali to ne utiče na zaključak eksperimenta.Do sada sam procijenio 10 komercijalnih proizvoda za uklanjanje DNK.Samo proizvodi br. 1, br. 6 i br. 8 mogu efikasno razgraditi plazmidnu DNK u tečnom stanju.Ostali proizvodi gotovo da nemaju efekta.

Tabela 1. Učinak uklanjanja nukleinske kiseline komercijalno dostupnog sredstva za uklanjanje DNK

2. Eksperiment s efektom uklanjanja DNK najčešće korištenih dezinficijensa

1. Pregled uobičajenih dezinficijensa

Postoje mnoge vrste dezinficijensa koji se obično koriste u laboratorijama: aldehidi, fenoli, alkoholi, kvarterne amonijumove soli, peroksidi, preparati hlora i kiseline i baze.Dezinfekcioni efekti ovih dezinficijensa na mikroorganizme su u potpunosti potvrđeni eksperimentima, ali nema dovoljno eksperimentalnih podataka o efektu razgradnje nukleinskih kiselina.Laboratorijima za testiranje nukleinske kiseline potrebno je sredstvo za dezinfekciju koje ne samo da ima dobar dezinfekcijski učinak na mikroorganizme, već može i razgraditi DNK.Rezultati ispitivanja pokazuju da samo dva hlorna preparata od 84 dezinficijensa i trihloroizocijanurske kiseline i 1 M hlorovodonične kiseline ispunjavaju uslove.Budući da je 1 M hlorovodonična kiselina veoma korozivna, preporučuje se da se preparati hlora koriste kao otpad u laboratorijama za ispitivanje nukleinskih kiselina.Međutim, preparati hlora su korozivni za metale i ne mogu se koristiti za dezinfekciju instrumenata i opreme.

Tabela 2 Efekti uklanjanja DNK različitih vrsta dezinficijensa

2. Minimalna efektivna koncentracija preparata hlora

Sredstva za dezinfekciju na bazi hlora imaju snažan efekat razgradnje DNK, ali zbog korozivnosti i iritacije metala mogu se koristiti za čišćenje podova, nemetalnih radnih ploča, vrhova za namakanje, epruveta za centrifugiranje i drugih testnih predmeta.

Prema "Novim tehničkim smjernicama za dezinfekciju epidemije koronarne pneumonije": Zagađivači (krv pacijenata, izlučevine i povraćanje) dostupni hlor 5g/L-10g/L dezinficijens koji sadrži hlor;podovi, zidovi i površine objekata koriste raspoloživo hlorno dezinfekciono sredstvo od 1 g/L: odeća, posteljina i drugi tekstil se prvo natapaju dezinfekcionim sredstvom za dezinfekciju hlora sa 0,5 g/L raspoloživog hlora 30 minuta, a zatim se čiste kao i obično.

Tabela 3. Učinak uklanjanja DNK različitih koncentracija hlornog dezinficijensa

Rezultati ispitivanja pokazuju da: kada je efektivna koncentracija hlora veća ili jednaka 1,2 g/L, dezinfekciono sredstvo koje sadrži hlor može u potpunosti razgraditi 100 kopija/μL plazmida kada se koristi 5 minuta.Kada djeluje 10 minuta, 84 dezinficijens sa efektivnom koncentracijom hlora većom ili jednakom 0,6 g/L može potpuno razgraditi 100 kopija/μL plazmida.

3. Eksperiment uklanjanja zraka zagađenog aerosolom nukleinske kiseline

Kako očistiti zrak zagađen aerosolima nukleinske kiseline?Većina misli je da se stvori okruženje kontaminirano aerosolom, a zatim ga očisti, ili da se očiste nukleinske kiseline nakon kontaminacije.Za mene je besmislen eksperiment koji se ne može ponoviti, a rezultati eksperimenta ne mogu kvantitativno analizirati, pa sam posudio neke metode dezinfekcije zraka dezinfekcijom.Pogledajte "GB27948-2020 Opći zahtjevi za sredstva za dezinfekciju zraka" i "Tehničke specifikacije za dezinfekciju"

1. Ispitni materijali

1.1 Odstranjivač DNK: U ovom eksperimentu odabrana su dva komercijalno dostupna sredstva za uklanjanje DNK 6 i 8 u Tabeli 1.

1.2 Test plazmida: S obzirom da će CT vrijednost većine laboratorijskih zagađenja biti veća od 30, koncentracija plazmida gena ASFV korištenog ovog puta je oko 100 kopija/μL, a fluorescentni kvantitativni PCR CT je oko 31,07.Dodajte plazmid u pamučni štapić za kockanje i osušite na zraku.

1.3 Instrument za testiranje: Bilingkehan KVBOX dezinfekcioni instrument, koji je ljubazno podržan od strane Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., ima odlične performanse dezinfekcije vazduha sa sredstvom za dezinfekciju vodonik peroksida i može efikasno da ubije spore i druge mikroorganizme.

1.4 Prostor za testiranje: zatvoreni prozor za prijenos od oko 0,1 kubni metar.

2. Metoda ispitivanja

Količina dezinfekcionog sredstva postavljena na mašini za dezinfekciju je 10ml, a koncentracija je 100ml/m3, što je mnogo više od "GB27948-2020 Opšti zahtevi za dezinfekciona sredstva za vazduh": kada se koristi dezinfekcija aerosol sprejom, količina dezinfekcionog sredstva treba da bude ≤10 ml/m