Laboratorijsko ispitivanje počinje uzimanjem uzoraka, a prikupljanje uzoraka je najlakše previdjeti.Najvažnija stvar za prikupljanje uzoraka je odabrati ispravan tip uzorka, koristiti odgovarajuće alate za uzorkovanje i izvršiti razuman transport i obradu.

I. Tip uzorka

Uobičajeni tipovi uzoraka su sljedeći:

Metoda uzorkovanja može se odnositi na tehničke specifikacije za praćenje okoliša novog korona virusa na poljoprivrednom trgovačkom (čaršijskom) tržištu”:

1. Uzmite uzorke brisa iz grla, ruku, odjeće i drugih predmeta praktičara: potrebno je koristiti otopinu za konzerviranje virusa u epruveti za uzorkovanje virusa i potpuno infiltrirati pamučne briseve za uzorkovanje.Površina tla) se više puta nanosi i ispire više od 3 puta.Istovremeno je potrebno izvršiti višestruko distribuirano uzorkovanje na površini uzorkovanog objekta.

2. Uzorci površinskih briseva hrane: Uzorci hrane se ne mogu uzeti direktno.Hranu koja se sakuplja treba pažljivo odvojiti i pohraniti u čistu vreću za uzorkovanje prije uzimanja uzoraka brisa.Potrebno je koristiti otopinu za konzerviranje virusa u epruveti za uzorkovanje virusa, nakon potpunog namočenja pamučnog štapića za uzorkovanje, više od 3 puta više od 3 puta razmazati i isprati površinu uzorka hrane koji se uzima.Istovremeno je potrebno izvršiti višestruko distribuirano uzorkovanje na površini uzorka.

3. Uzorci kanalizacije: Prema distribuciji drenažnog sistema na tržištu, izaberite 2-3 lokacije za uzorkovanje otpadnih voda, fokusirajući se na sakupljanje unutrašnje cevovodne mreže, nizvodno od pravca toka vode ili vezu sa komunalnom mrežom cevi.Da biste sakupili uzorak štapića, uronite ga u kanalizaciju pomoću pamučnog štapića za uzorkovanje kako bi on adsorbirao kanalizaciju i isperite ga u cijevi za uzorkovanje više od 3 puta.Za prikupljanje uzoraka kanalizacije koristite polietilenske plastične boce za prikupljanje uzoraka otpadne vode od 30-500 mL;za sakupljanje otpadnih voda zapremine veće od 500 mL mogu se koristiti polietilenske plastične kante ili posebna oprema za obogaćivanje uzoraka vode na licu mesta.Istovremeno, za lokaciju uzorkovanja otpadnih voda potrebno je provesti višestruko distribuirano uzorkovanje.

4. Uzorci životinja: Za žive životinje, brisevi za uzorkovanje se mogu koristiti za prikupljanje briseva površine tijela, orofaringealnih briseva i analnih briseva, a uzorci izmeta ili sekreta se također mogu prikupiti i u skladu s tim evidentirati na kartonskom listu.Za uzorke životinja koje su podvrgnute uklanjanju kože itd., koristite pamučne štapiće za prikupljanje uzoraka brisa s površine tijela i tjelesnih šupljina.Potrebno je koristiti otopinu za konzerviranje virusa u epruveti za uzorkovanje virusa kako bi se u potpunosti infiltrirala pamučni štapić za uzorkovanje, a zatim ponoviti nanošenje površine uzorka hrane koji treba uzeti.Shabu više od 3 puta.Istovremeno je potrebno izvršiti višestruko distribuirano uzorkovanje na površini uzorka.

5. Ostali uređaji: kontejneri za transport i uzgoj životinja kao što su kavezi ili akvarijumi.Prvo, promatrajte ili razumite specifične vrste životinja koje se čuvaju i uzgajaju u kontejneru i sakupite uzorke štapića sa unutrašnje stijenke posude ili tečne uzorke sadržaja.

6. Prikupite uzorke aerosola u prostorima gdje se ljudi okupljaju, slabo ventiliranim lokalnim trgovačkim prostorima, uredima i toaletima.

II. Alati za uzorkovanje
1. Cev za sakupljanje krvi
Ako kasnije treba da uradite testiranje nukleinske kiseline i uzorke antikoagulansa, preporučuje se upotreba vakuumske krvne žile koja sadrži EDTA antikoagulans za sakupljanje krvi;za uzorke seruma preporučuje se upotreba vakuumskog krvnog suda bez antikoagulansa.

2. Bris za uzorkovanje

Preporučljivo je koristiti polipropilenske briseve umjesto briseva od kalcijum alginata ili briseva sa drvenim motkama, jer mogu sadržavati tvari koje inaktiviraju određene viruse i inhibiraju PCR testiranje.Brisići sa pamučnim glavama se ne mogu koristiti, jer pamučna vlakna imaju snažnu adsorpciju proteina i nije lako eluirati u kasniji rastvor za konzerviranje.

U “Tehničkim specifikacijama za 10-u-1 mješovito prikupljanje i otkrivanje novih nukleinskih kiselina koronavirusa” jasno je propisano da “bris za uzorkovanje treba biti izrađen od poliestera, najlona i drugih nepamučnih i nekalcij alginatnih materijala, a drška od nedrvenog materijala.Tačka loma je oko 3 cm od vrha glave štapića, što je lako slomiti.”

CDC u Sjedinjenim Državama također je spomenuo „Koristite samo tampone od sintetičkih vlakana s plastičnim ili žičanim drškama.Nemojte koristiti briseve od kalcijum alginata ili briseve sa drvenim drškama,jer mogu sadržavati tvari koje inaktiviraju neke viruse i inhibiraju PCR testiranje.

Trenutno se široko koristi sterilni najlonski štapić za jednokratnu upotrebu u kombinaciji s plastičnom šipkom.Štap za flocking ima bolju apsorpciju vode i brzinu oslobađanja.Prema različitim mjestima uzorkovanja, glava brisa također ima različite veličine i vlakna.Debljina.”

3. Rješenje za očuvanje transporta uzorka

Rješenje za očuvanje inaktivacije virusa: odgovarajuća količina koncentracije gvanidinske soli i raznih komponenti za lizu virusa mogu direktno lizirati virus kako bi oslobodili nukleinsku kiselinu, inaktivirali RNazu i Dnazu i osigurali integritet nukleinske kiseline, koja se može koristiti za naknadnu qPCR detekciju.Ne može se koristiti za uzgoj i izolaciju virusa.

Rješenje za transport i očuvanje virusa: sadrži soli, aminokiseline, vitamine, glukozu i proteine ​​potrebne za opstanak virusa, koji mogu održati aktivnost virusa.Može se koristiti za ekstrakciju nukleinske kiseline i detekciju virusa u budućnosti, a može se koristiti i za kultivaciju i odvajanje virusa.

4. Epruveta za čuvanje uzorka i vrećica za uzorke

Epruveta za skladištenje uzoraka treba da bude sterilna plastična epruveta sa poklopcem na navoj koji ne adsorbuje nukleinsku kiselinu.Svaku epruvetu za uzorke treba pokriti vrećicom za uzorke kako bi se spriječilo curenje i kontaminacija uzorka.

III.Interferirajuće supstance u uzorku

Interferirajuće supstance u PCR eksperimentima

1. endogeni interferent

Supstance prisutne u tjelesnom uzorku mogu ometati detekciju drugih supstanci.

krv:hem (>1mg/ml), hemin (>0,1ng/μl), trigliceridi, IgG, itd.;

urin:Urea (20mM);

stolica:biljni polisaharidi, holat;

tkivo:proteaza, kolagen;

Mlijeko: proteaza, jon kalcijuma;

Droge: antibiotici, antivirusni lijekovi, hormoni itd.

ostalo.

2. egzogeni interferent

Dolazi od supstanci koje mogu ometati otkrivanje drugih supstanci in vitro.Aditivi za uzorke i supstance koje se mogu kontaktirati tokom prikupljanja i obrade uzoraka:

Test zalihe: gel za odvajanje seruma, posuda za prikupljanje uzoraka i gumeni čep, kateter, tekućina za ispiranje katetera, puder za rukavice, itd.

Antikoagulant: heparin (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM), itd.;

Organski rastvarači: izopropanol (>0,1 IU/ml), betain, dimetil sulfoksid, formamid, glicerin, PEG, itd.;

Sredstva za dezinfekciju: alkoholi (etanol>1%), aldehidi, fenoli (fenol>0,2%), peroksidi, jake kiseline (HCL), jake alkalije (NaOH) itd.;

Deterdžent:SDS (>0,005%);

Zemlja: Humus

Boja: Indigo

ostalo.

U stvarnim uvjetima uzimanja uzoraka na otvorenom, kao što je prikupljanje uzoraka iz okoliša, uzorci mogu sadržavati različite ometajuće supstance, a sastav interferirajućih supstanci na svakoj lokaciji je različit, što zahtijeva da se eksperimenti s PCR interferencijama izvode u skladu s lokalnim uvjetima.

IV.Uvjeti skladištenja i transporta uzoraka

Svježe prikupljene kliničke uzorke treba poslati u laboratoriju u roku od 2 do 4 sata nakon uzimanja na 2°C do 8°C.Čuvati na 4℃ u roku od 24h.Uzorke koji se koriste za izolaciju virusa i detekciju nukleinske kiseline treba testirati što je prije moguće.Uzorci koji se mogu testirati u roku od 24 sata mogu se čuvati na 4°C;uzorke koji se ne mogu otkriti u roku od 24 sata treba čuvati na -70°C ili niže (ako ne- Čuvati na 70°C u frižideru na -20°C).

Sažetak:Standardizovano sakupljanje, transport i skladištenje uzoraka su od suštinskog značaja za naknadno testiranje.Lažno negativni rezultati mnogih laboratorijskih testova uzrokovani su nepravilnim prikupljanjem, transportom i skladištenjem uzoraka koji dovode do razgradnje virusne nukleinske kiseline.Međutim, mnoge laboratorije još uvijek ignoriraju važnost uzorkovanja.Nadam se da ovaj članak može probuditi svačiju pažnju na uzorkovanje i napraviti naučnije i razumnije uzorkovanje!

Povezani proizvod:

Komplet za detekciju nukleinske kiseline varijante SARS-CoV-2 (I) (Multipleks PCR fluorescentna metoda sonde) - za otkrivanje mutanata iz Brazila, Južne Afrike i UK