Uvod:

Molekuli RNK mogu u ekstenzivnoj interakciji sa drugim biološkim molekulima, kao što su proteini, DNK i RNK, i tako postoje u ćelijama i organizmima u obliku makromolekularnih kompleksa.Među njima, RNK-proteinski kompleksi su postojanje i funkcija RNK Jedan od važnih oblika.RNA pull-down je klasična metoda za skrining i identifikaciju RNA molekula, posebno interagirajućih proteina lncRNA molekula, i priznata je od strane većine istraživača i međunarodnih autoritativnih akademskih časopisa.Danas će FORREGENE podijeliti s vama eksperimentalni princip i tehnički proces skidanja RNA, možda ga možete koristiti

1. Eksperimentalni princip RNA pull down tehnologije:

In vitro transkripcija i sinteza biotinom označenih ciljnih lncRNA ili lncRNA fragmenata (uključujući RNA fragmente koji se koriste kao pozitivne i negativne kontrole) i inkubacija sa ćelijskim ekstraktima;koristite magnetne perle usidrene avidinom za prikupljanje kompleksa RNA-protein ili RNA-RNA. Nakon temeljnog ispiranja, kompleks se eluira.Ako detektujete ciljni protein proteina koji je u interakciji sa lncRNA, izvršite elektroforezu proteina na proizvodu RNA-pull down, detektujte ciljni protein bojenjem srebrom i izrežite gel za masenu spektrometriju;također direktno izvršiti western blot verifikaciju na padajućem proizvodu;ako se otkrije. Za RNA ciljne molekule koje stupaju u interakciju sa lncRNA, proizvodi RNA-pull down se podvrgavaju ekstrakciji RNK i vrši se specifična qRT-PCR detekcija.

2. Proces eksperimentiranja tehnologije skidanja RNA:

3. Tehnička služba za skidanje RNA FOREGENE:

Ćelijska kultura

Priprema ekstrakta ukupnih/nuklearnih/plazma proteina ćelija

Eksperiment povlačenja RNA

SDS-PAGE elektroforeza, srebrna boja

Masena spektrometrija i WB eksperimenti

Eksperimentalni izvještaj

4. Eksperimentalni slučaj

Sljedeća slika prikazuje rezultate FJ Bio-Bio RNA pull down i detekcije SDS-PAGE elektroforeze, u kojoj crvena strelica označava pojas razlike:

Istraživačka grupa profesora Song Xua sa Univerziteta Sichuan akumulirala je 15 godina dugotrajne akumulacije u polju istraživanja lncRNA.Foregene Bio i istraživačka grupa profesora Song Xua sarađivali su na lansiranju RNA pull down tehnologije lncRNA, koja će vam dati zadovoljavajući rezultat za vaš eksperiment.