Koliko znaš

O Nekstrakcija ukleinske kiseline

Početak i kraj pročišćene nukleinske kiseline

Sve je teško na početku, pročišćena nukleinska kiselina je najviše

Započinjanje molekularnih eksperimenata, za naknadne eksperimente

Uspjeh ili neuspjeh ima presudan utjecaj.

UV spektrofotometar u tragovima/ultratragovima favoriziraju mnogi naučni istraživači jer može jednostavno, brzo i ekonomično otkriti koncentraciju nukleinske kiseline i ostatke proteina i jona soli.

Kao što svi znamo, A260 znači OD vrijednost apsorpcije nukleinske kiseline, A280 znači OD vrijednost apsorpcije koncentracije proteina, A230 znači OD vrijednost apsorpcije koncentracije jona soli, tako da A260 može pretvoriti koncentraciju nukleinske kiseline, A260/280 znači proteinski ostatak, A260/230 znači ostatak jona soli i to je samo pravilo mjerenja, ali ovo je otkriveno na osnovu rezultata istraživanja, ali ovo je otkriveno na osnovu rezultata istraživanja.konvencionalno” vjerovati da može objasniti čistoću DNK i RNKodređenoj meri.To nije jedini standard za identifikaciju prinosa i čistoće nukleinske kiseline, koristi se samo kao referenca i nije „zlatni standard“.

Thermo Fisher ND-2000 priručnik naglašava pouzdanost rezultata ispitivanja

Razlog je taj što rezultati dobijeni korišćenjem mikro/ultramikro UV spektrofotometra samo sa strane odražavaju prinos i čistoću nukleinske kiseline, a postoji mnogo faktora koji utiču (optički put, zapremina uzorka, koncentracija uzorka, pH vrednost, drugi joni koji utiču na merenje apsorbancije, itd.), izmerena vrednost OD nije nužno tačna.Istovremeno, zbog nedostatka specifičnosti materijala za određivanje vrijednosti apsorpcije, jednolančana DNK, dvolančana DNK, RNA, dNTP i neki proteini svi imaju apsorpcione vrhove na talasnoj dužini od 260 nm, a koncentracija određena samo pomoću A260 nije nužno prava DNK ili RNK.Koncentracija, njen integritet i degradacija se ne mogu suditi.

Kako onda ocijeniti kvalitetu naše pročišćene nukleinske kiseline?Osim upotrebe mikro/ultramikro UV spektrofotometra za detekciju, potrebne su i metode kao što je elektroforeza u agaroznom gelu da bi se vizualno prikazala čistoća i integritet nukleinske kiseline, te da bi se u određenoj mjeri pokazala koncentracija.Na taj način je vjerodostojan prinos i čistoća nukleinske kiseline dobiveni rezultatima detekcije različitim metodama.

Eksperimentalno poređenje grafikona

Genomska DNK ćelija H1299 ekstrahovana je korišćenjem kompleta za ekstrakciju DNK kompanije A i primećena je značajna kontaminacija nečistoćama, što je rezultiralo visokim vrednostima OD

(vrijednost mjerenja OD i odgovarajući elektroferogram)

Indeks evaluacije

Postoji li “zlatni standard” za testiranje prinosa nukleinske kiseline i kvaliteta?

Koliko znamo, ne postoji jednostavan, brz i jeftin metod.Bilo da se radi o spektrofotometru, gel elektroforezi ili masenoj spektrometriji, svi oni odražavaju koncentraciju i čistoću nukleinske kiseline u otopini s različitih aspekata, te ih je potrebno ocijeniti upućivanjem jedni na druge.

Najbolji indeks evaluacije je uvijeknaknadnu eksperimentalnu primjenu.Ne utiče na efikasnost reverzne transkripcije i PCR amplifikacije.Dobivanje pouzdanih produkata amplifikacije i Ct vrijednosti, te dobivanje kompletne sekvence sekvenciranjem je uspješna ekstrakcija nukleinske kiseline.

Da sumiramo, pogled na teoriju samo omjera trebao bi biti osporen stavom o “korištenju dobrih eksperimentalnih rezultata nizvodno kao dobrih parametara ekstrakcije”!

Preporučeni kompleti za ekstrakciju DNK RNK Foregene za postizanje visoke čistoće DNK/RNA:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/