Uspostaviti SOP PCR eksperimenta kako bi se standardiziralo ponašanje eksperimentalnog osoblja.
Eksperimentator se striktno pridržava operativnih procedura i minimizira zagađenje PCR-om koje može biti uzrokovano ljudskim faktorom ili sprečava nastanak zagađenja.Osim toga, eksperimentator treba da posjeduje odgovarajuća stručna znanja i vještine, uključujući stručnost u rukovanju pripadajućom opremom, pojašnjavanju cjelokupnog procesa rada, ovladavanju metodama tretmana kontaminacije i metodama laboratorijske kontrole kvaliteta, te sposobnošću da pravilno interpretira rezultate ispitivanja.
Uspostaviti standardnu PCR laboratoriju.
PCR laboratorija je u principu podijeljena na četiri područja, a to su područje pripreme reagensa, područje obrade uzorka, područje amplifikacije i područje analize proizvoda amplifikacije.Prve dvije oblasti su područja prije pojačanja, a posljednje dvije oblasti su područja nakon pojačanja.Zona pre pojačanja i zona postamplifikacije treba da budu strogo odvojene.Eksperimentalni materijali, reagensi, papir za snimanje, olovke, materijali za čišćenje, itd., mogu teći samo iz područja prije amplifikacije u područje poslije amplifikacije, odnosno iz područja pripreme reagensa → područja obrade uzorka → područja amplifikacije → područja analize proizvoda amplifikacije, i ne smiju teći unazad.Protok zraka u laboratoriji također treba da teče iz područja prije pojačanja u područje nakon pojačanja, a ne da struji unatrag.Idealan dizajn PCR laboratorija prikazan je u nastavku:
Slika A: Idealan način postavljanja PCR laboratorije sa negativnim pritiskom u tampon prostoriji
Slika B: Idealan način postavljanja PCR laboratorije sa pozitivnim pritiskom u tampon prostoriji
Dijagrami postavljanja PCR laboratorije dati na slici A i slici B trebali bi biti idealniji način postavljanja, a laboratorija sa uvjetima može se pozvati na ovaj način za dizajn.Za obične laboratorije, preporučuje se da se područje PCR amplifikacije i područje analize proizvoda mogu razdvojiti, a otvor poklopca treba što je više moguće smanjiti u području pripreme uzorka i području PCR amplifikacije.Zapamtite: Strogo je zabranjeno odnošenje proizvoda i eksperimentalnih zaliha u području analize proizvoda u područje pripreme uzorka i područje PCR amplifikacije.
Ako laboratorij obavlja samo PCR detekciju i identifikaciju, preporučuje se korištenje fluorescentne kvantitativne PCR umjesto konvencionalne PCR.
Rezultati kvantitativnog PCR detekcije fluorescencije mogu se prikupiti i analizirati fluorescentnim signalima, tako da nema potrebe za otvaranjem poklopca za elektroforezu nakon reakcije, čime se izbjegava kontaminacija PCR produkta uzrokovana curenjem produkta reakcije u aerosole.Ako povećate broj otvora poklopca tokom koraka punjenja gel elektroforeze, vjerovatno će doći do kontaminacije aerosolom.Preporučuje se promovirati primjenu kvantitativne PCR i postupno zamijeniti kvalitativni PCR.
Za PCR reakciju se koristi UNG anti-PCR sistem kontaminacije proizvoda.
Sistem koristi dUTP umjesto dTTP.Nakon PCR reakcije, svi PCR proizvodi (DNK fragmenti) se inkorporiraju sa dUTP;u sljedećem krugu PCR reakcije, enzim UNG koji je dodat sistemu se inkubira na 37°C 5 minuta prije PCR-a, koji može specifično razgraditi sve fragmente DNK koji sadrže dUTP, a zatim izvesti PCR reakciju.Ovo može u potpunosti ukloniti aerosolnu kontaminaciju uzrokovanu PCR proizvodima.Efekat je prikazan na slici ispod:
Napomena: Za direktnu PCR seriju, možete odabrati serijske proizvode sistema Foregene za kontaminaciju proizvoda protiv PCR-aPredloži
Za laboratorije koje provode veliko testiranje genotipizacije, snažno se preporučuje korištenje UNG anti-PCR sistema kontaminacije proizvoda za testiranje reagensa uz izgradnju razumnih laboratorija.
Podsjetnik: Upotreba ovog sistema ne može ukloniti kontaminaciju PCR proizvoda koja je već uzrokovana.Stoga, UNG sistem treba koristiti na početku relevantnog testa, a UNG sistem treba koristiti za PCR amplifikaciju, kako bi se spriječila kontaminacija PCR proizvoda Lažno pozitivan.
Preporučljivo je koristiti Foregene Direct PCR-UNG sistem prilikom provođenja velikih testiranja, kao što su:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Direktan PCR set sjemena biljaka-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Ova serija kompleta iz Foregenene samo da može brzo i u velikim razmjerima izvesti PCR detekciju, već i efikasno spriječiti i kontrolirati kontaminaciju PCR proizvoda.
Vrijeme objave: 19.03.2021
