1: Zamijenite eksperimentalne zalihe na vrijeme

Postavite (NTC) negativnu kontrolu i ponovite to mnogo puta.Kada se ustanovi da postoji kontaminacija PCR proizvodom u laboratoriji, na vrijeme zamijenite sve eksperimentalne zalihe.Kao što su: ponovo razrijediti i pripremiti prajmere, ponovo sterilizirati vrh pipete, EP epruvetu, ddH2O, itd., zamijeniti novom pipetom i privremeno posuditi druge laboratorije za izvođenje PCR eksperimenata.Kontaminirani laboratorij mora se ventilirati i ozračiti ultraljubičastim zracima dok se kontaminacija PCR produktom ne eliminira prije nego što se nastavi s eksperimentom.

2: Produžite vreme izlaganja UV zračenju

Vrijedi napomenuti da za uklanjanje kontaminacije DNK redovno ultraljubičasto zračenje treba produžiti za 2 sata nego inače.Čak i tako, učinak UV zračenja na uklanjanje malih fragmenata (ispod 200 bp) kontaminacije DNK još uvijek nije dobar.

Ultraljubičasta talasna dužina (nm) je generalno 254/300nm i dovoljno je zračiti 30 minuta.Treba napomenuti da prilikom odabira UV zračenja za eliminaciju kontaminacije rezidualnih PCR proizvoda, treba uzeti u obzir dužinu PCR proizvoda i distribuciju baza u sekvenci proizvoda.UV zračenje je efikasno samo za dugačke fragmente iznad 500 bp, a ima mali efekat na kratke fragmente.

Tokom UV zračenja, pirimidinske baze u PCR proizvodu će formirati dimere.Ovi dimeri mogu prekinuti produžetak, ali ne mogu svi pirimidini u lancu DNK formirati dimere, a UV zračenje također može razbiti dimere..Stepen formiranja dimera zavisi od UV talasne dužine, tipa pirimidinskog dimera i redosleda nukleotida u blizini mesta dimera.Stoga, ako su PCR amplificirani fragmenti mali, preporučuje se korištenje UNG anti-PCR sistema kontaminacije proizvoda.

3: Često korišteni čistači zagađivača DNK

Aerosoli se lako stvaraju kada se dodaju pipete, što je teško izbjeći, a brzo će se taložiti.Stoga je nesumnjivo dobar izbor često koristiti posebne čistače zagađivača DNK kako bi se spriječilo širenje zagađenja DNK.

4: Koristite UNG sistem protiv zagađenja

Nakon što se ukloni kontaminacija PCR proizvodom, laboratorija za testiranje može koristiti UNG anti-PCR sistem kontaminacije proizvoda kako bi spriječila kontaminaciju PCR proizvoda.U općim laboratorijama možete izvesti jednostavne eksperimentalne podjele, strogo odvojiti područje PCR proizvoda od drugih područja, uspostaviti određena laboratorijska pravila i propise i provesti relevantnu obuku kako biste spriječili pojavu kontaminacije PCR proizvoda.

Preporuke: Uspostavljanje razumne PCR laboratorije, održavanje dobrog okruženja za PCR, formulisanje standardnih PCR operativnih procedura i negovanje rigorozne operativne svesti eksperimentatora su ključevi za sprečavanje ili smanjenje zagađenja PCR eksperimenata.