W:Brate, reverzna transkripcija je završena i konačno posljednji korak – fluorescentni kvantitativni PCR!Hej, brate, šta je kvantitativni PCR u realnom vremenu?
M:PCR uvek znaš, zar ne?
W: Znate, PCR je lančana reakcija polimeraze, i to je tehnologija koja povećava DNK!
M: Skoro je… To je tehnička metoda da se ciljna sekvenca pojača na više od milion puta kroz specifične prajmere, ali to samo ukazuje na prisustvo ili odsustvo ciljne sekvence, i ne može odrediti količinu početnog šablona.Fluorescentni kvantitativni PCR je tehnička metoda razvijena za rješavanje ovog problema.PCR u realnom vremenu i količinski PCR (qPCR) općenito se odnose na njega.
W: Razlika od običnog PCR-a leži u kvantifikaciji fluorescencije?
M: Da, to jest, u fazi produžetka svakog PCR ciklusa, detektuje se intenzitet signala fluorescencije, a početna količina šablona se može izračunati prema promjeni intenziteta signala.
W: To je tako komplikovano!Moram li ovo sam izračunati?
M: Ovo zahteva da učite polako, najbolje je da budete u stanju da razumete princip.Sada se prvo možete fokusirati na CT vrijednost, koja je relativno intuitivan eksperimentalni podatak, a njegova veličina odgovara veličini početne količine šablona.Postoje i grafikoni kao što su krive pojačanja i krive topljenja.Oni imaju posljednju riječ o tome da li je vaš eksperiment uspješan ili ne.
W: Oh, brate.Onda ću napraviti qPCR eksperiment!
M: Obratite posebnu pažnju da ne dodajete šablone u područje reagensa, inače će vaša neiskorištena mješavina biti lako kontaminirana!
W: Imam ga!

Real Time PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Veća efikasnost, veća specifičnost
Visoka osjetljivost, dobra kompatibilnost