Sljedeća analiza mogućih problema uBuccalbris/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.
Kolona za prečišćavanje je začepljena
U ovom kompletu, u operaciji ekstrakcije genomske DNK, kolona za pročišćavanje se direktno adsorbira na mješavinu enzimske lize uzorka bez koraka centrifugiranja, a kolona za prečišćavanje može biti blokirana zbog nepotpune enzimizacije i visokog viskoziteta uzorka.
Sljedeći mogući uzroci su sljedeći:
1. Nepotpuna enzimska probava uzoraka tkiva.
Preporuka: Vrijeme obrade uzorka Foregene Protease može se na odgovarajući način produžiti ili se supernatant može uzeti nakon centrifugiranja na 12.000 o/min (~13.400× g) 5 min.
2. Prekomjerna upotreba uzoraka tkiva ili velikih tkiva.
Preporuka: Najbolje je da ne prelazite 1Buccal bris u uzorku;ako je uzorak prevelik, povećajte dozu pufera ST1, foregen proteaze, pufera ST2 u skladu s tim.
3. Viskoznost uzorka je previsoka.
Preporuka: Uzorci se mogu na odgovarajući način razrijediti sa 10 mM Tris-HCl prije ekstrakcije genomske DNK.
4. Fragmenti krvne karte su usisani.
Preporuka: Prolazno vrijeme centrifugiranja koraka 6 genomske ekstrakcije krvne mrlje (FTA kartica) može se na odgovarajući način produžiti.
Nizak prinos ili bez DNK
Često postoji niz faktora koji utiču na prinos genomske DNK, uključujući porijeklo uzorka, uslove skladištenja uzorka, pripremu uzorka, manipulaciju itd.
Genomska DNK se ne može dobiti tokom ekstrakcije
Mogući uzroci su sljedeći:
1. Nepravilno čuvanje uzoraka ili predugo skladištenje dovodi do degradacije genomske DNK.
Preporuka: Oralne briseve poželjno je uzimati svježe, a nije preporučljivo koristiti sačuvane briseve za operacije ekstrakcije genomske DNK;uzorci krvnih mrlja trebaju osigurati da je kvalitet kvalifikovan i da vrijeme skladištenja ne bi trebalo biti predugo.
2. Premala upotreba tkiva može dovesti do izostanka ekstrakcije odgovarajuće genomske DNK.
Preporuka: Pratitebuccal upute za uzimanje uzoraka brisa u uputstvu za rad i obrišite što je više moguće kako bi se dovoljno ćelija moglo pričvrstiti na oralni bris za ekstrakciju genomske DNK;za vađenje uzorka krvne mrlje, područje rezanja krvne mrlje može se na odgovarajući način povećati.
3. Foregene proteaza je nepropisno očuvana, što dovodi do smanjenja njene aktivnosti ili inaktivacije.
Preporuka: Potvrdite uslove skladištenjaForegen proteaze ili je zamijenite novom foregen proteazom za enzimsku reakciju.
4. Nepravilno očuvanje kompleta ili vrijeme skladištenja je predugo, što rezultira kvarom nekih komponenti u kompletu.
Preporuka: Kupite noviBuccal bris DNKizolacija komplet za srodne procedure.
5. Pufer WB ne dodaje apsolutni etanol.
Preporuka: Potvrdite da pufer WB dodaje tačnu količinu apsolutnog etanola.
6. Eluent nije pravilno dodat silikonskom filmu.
Preporuka: Dodati 65°Cprethodno zagrijani eluent spusti se na sredinu silikonske membrane i ostavi na sobnoj temperaturi 5 minuta kako bi se povećala efikasnost eluiranja.
Low-yield genomske DNK izolovan
Sljedeći mogući uzroci su sljedeći:
1. Nepravilno čuvanje uzoraka ili predugo skladištenje dovodi do degradacije genomske DNK.
Preporuka: Poželjno je da se brisevi usne šupljine uzimaju svježe, a konzervirani brisevi se ne smiju koristiti za ekstrakciju genomske DNK.
2. Ako je količina uzorka tkiva premala, sadržaj ekstrahirane genomske DNK će biti manji.
Preporuka: Slijedite upute za uzorkovanje oralnog brisa u uputstvu za upotrebu, obrišite što je više puta moguće kako bi se dovoljno ćelija moglo pričvrstiti na oralni bris za ekstrakciju genomske DNK.
3. Foregene proteaza je nepropisno očuvana, što dovodi do smanjenja njene aktivnosti ili inaktivacije.
Preporuka: Potvrdite uslove skladištenjathe Foregen Protease ili je zamijenite novom Foregen proteaza za enzimsku reakciju.
4. Problemi sa eluentom.
Preporuka: Koristite pufer EB za eluiranje;ako koristite ddH2O ili drugi eluenti, potvrdite da je pH eluata između 7,0-8,5.
5. Eluat nije pravilno dodan kap po kap.
Preporuka: Dodajte kapi eluenta u sredinu silikonske membrane i ostavite na sobnoj temperaturi 5 minuta da povećate efikasnost eluiranja.
6. Tečnost za eluiranje se akumulira premalo.
Preporuka: Koristite eluent za eluiranje genomske DNK kako se zahtijeva u uputama, baremni manje ni više od 15μl.
Low čistoća of genomska DNKizolovan
Niska čistoća genomske DNK može dovesti do neuspjeha ili nezadovoljavajućih rezultata nizvodnih eksperimenata, kao što su: enzimi se ne mogu otvoriti, PCR ne može dobiti genski fragment od interesa, itd.
Mogući uzroci su sljedeći:
1. Heteroproteinsko zagađenje, RNA zagađenje.
Analiza: Kolona za prečišćavanje nije isprana puferom PW;kolona za pročišćavanje pufera PW nije isprana pravilnom centrifugalnom brzinom.
Preporuka: Uverite se da nema taloženja u supernatantu pre dodavanja etanola;obavezno operite kolonu za pročišćavanje prema uputama i ovaj korak se ne može izostaviti.
2. Zagađenje ionima nečistoćama.
Analiza: Kolona za pročišćavanje pufera WB je izostavljena ili je isprana samo jednom, što je rezultiralo zaostalom ionskom kontaminacijom.
Preporuka: Obavezno isperite pufer WB 2 puta prema uputstvima kako biste uklonili zaostale jone što je više moguće.
3. Kontaminacija RNA enzima.
Analiza: Strane RNaze su dodane u pufer;Operacija ispiranja pufera PW bila je netačna, što je rezultiralo ostacima RNase, što je uticalo na nizvodne eksperimentalne operacije RNK, kao što je in vitro transkripcija.
Preporuka: Nukleinska kiselina Foregene serijeizolakompleti mogu ukloniti RNK bez dodatnog dodavanja RNKaze,dakle bukalni bris/FTA kartica komplet za izolaciju DNKneedn't dodati RNase;obavezno slijedite upute za kolonu za pročišćavanje pranja Buffer PW i ovaj korak se ne može izostaviti.
4. Ostatak etanola.
Analiza: Pufer WB nije izvršio centrifugiranje prazne epruvete nakon pranja kolone za prečišćavanje.
Preporuka: Izvršite ispravnu operaciju centrifugiranja prazne epruvete prema uputstvima.
5. Zagađenje drugim nečistoćama.
Analiza: Sačuvani uzorci ili specijalni uzorci nisu prethodno tretirani.
Preporuka: Temeljito prethodno obradite uzorak prema uputstvima.
Vrijeme objave: Mar-18-2022
