Vodič za analizu problema

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Nizak prinos ili bez DNK

Obično postoji mnogo faktora koji utiču na prinos genomske DNK, uključujući izvor uzorka, starost uzorka, uslove skladištenja uzorka i rad.

Genomska DNK nije mogla biti dobijena tokom ekstrakcije

1. Uzorci tkiva su nepropisno pohranjeni ili pohranjeni predugo, što rezultira degradacijom genomske DNK.

Preporuka: Čuvajte uzorke tkiva u tečnom azotu ili -20°C;pokušajte koristiti novosakupljene uzorke za ekstrakciju genomske DNK.

2. Premala količina uzorka može uzrokovati da se odgovarajuća genomska DNK ne ekstrahuje.

Preporuka: Za uzorke tkiva koji su pohranjeni duže vrijeme ili imaju ozbiljnu degradaciju genomske DNK, količina uzoraka tkiva može se na odgovarajući način povećati kako bi se izdvojila znatna genomska DNK.Količina uzorka može se odrediti prema potrebama DNK, ali svježi uzorak ne smije prelaziti 100 mg, a suhi uzorak ne smije biti veći od 30 mg.

3. Uzorak se ne melje tečnim azotom ili stavlja predugo nakon tečnog azota.

Preporuka: Tokom ekstrakcije DNK, uzorak treba potpuno samljeti tečnim azotom kako bi se razbio ćelijski zid;nakon mljevenja, prenesite uzorak praha u PL1 prethodno zagrijanu na 65°C što je prije moguće (kada se mljeveni prah otopi, genomska DNK će početi brzo da se razgrađuje) .

4. Nepravilno skladištenje Foregene Protease dovodi do smanjene ili inaktivirane aktivnosti.

Preporuka: Potvrdite uslove skladištenja Foregene Protease ili je zamenite novom Foregene Proteazom za enzimsku hidrolizu.

5. Komplet je nepropisno pohranjen ili pohranjen predugo, što uzrokuje kvar nekih komponenti u kompletu.

Preporuka: Kupite novi komplet za ekstrakciju genomske DNK biljke za povezane operacije.

6. Nepravilna upotreba kompleta.

Prijedlog: Kupite komplet za izolaciju DNK biljaka namijenjen uzorcima za ekstrakciju i pročišćavanje biljne genomske DNK.

7. Buffer WB bez dodavanja anhydrous etanol.

Preporuka: Obavezno dodajte tačnu količinu apsolutnog etanola u pufer WB.

8. Eluent nije pravilno kapao na silicijumsku membranu.

Prijedlog: Dodajte prethodno zagrijani eluent na 65℃kap po kap na sredinu membrane silika gela i ostavite na sobnoj temperaturi 5 minuta da povećate efikasnost eluiranja.

Ekstrakcija za dobijanje genomske DNK niskog prinosa

1. Uzorak je nepropisno pohranjen ili pohranjen predugo, što rezultira degradacijom genomske DNK.

Preporuka: Čuvajte uzorke tkiva na -20℃;pokušajte koristiti novosakupljene uzorke tkiva za ekstrakciju genomske DNK.

2. Ako je količina uzoraka tkiva premala, ekstrahovana genomska DNK će biti manja.

Preporuka: Neki biljni uzorci su bogati vodom, kao što su vodene biljke kao što su alge, itd., doza se može na odgovarajući način povećati ili se voda može malo dehidrirati prije operacije.

3. Uzorci nisu temeljito mljeveni tečnim dušikom ili su ostavljeni na sobnoj temperaturi predugo nakon mljevenja.

Preporuka: mlevenje tečnog azota mora biti dovoljno, a zid ćelije uzorka treba da bude razbijen što je više moguće;odmah nakon mljevenja, uzorak praha treba prebaciti na 65℃prethodno zagrijani pufer PL1 za sljedeći korak.

4. Ne koristite ispravan komplet.

Preporuka: Koristite namjenski komplet za izolaciju DNK biljaka za ekstrakciju i pročišćavanje biljne genomske DNK.

5. Nepravilno skladištenje Foregene Protease dovodi do smanjene ili inaktivirane aktivnosti.

Preporuka: Potvrdite uslove skladištenja Foregene Protease ili je zamenite novom Foregene Proteazom za enzimsku hidrolizu.

6. Problem eluenta

Preporuka: Koristite pufer EB za eluiranje;ako koristite ddH₂O ili drugih eluensa, provjerite je li pH eluensa između 7,0-8,5.

7. Eluent nije pravilno kapao

Prijedlog: Dodajte kap za eluiranje u sredinu silicijumske membrane i ostavite je na sobnoj temperaturi 5 minuta da povećate efikasnost eluiranja.

8. Zapremina eluenta je premala

Prijedlog: Molimo koristite eluent za eluiranje genomske DNK prema uputama, najmanje najmanje 100μl.

Ekstrahovan genomski DNK niske čistoće

Niska čistoća genomske DNK će dovesti do neuspjeha ili lošeg efekta nizvodnih eksperimenata, kao što su: enzim se ne može izrezati, a ciljni genski fragment se ne može dobiti PCR-om.

1. Razna kontaminacija proteinima, kontaminacija RNK.

Analiza: Pufer PW nije korišten za pranje kolone;Pufer PW nije korišten za pranje kolone pri ispravnoj brzini centrifugiranja.

Prijedlog: pokušajte osigurati da nema taloženja u supernatantu kada se supernatant propušta kroz kolonu;obavezno operite kolonu za pročišćavanje puferom PW prema uputama i ovaj korak se ne može izostaviti.

2. Zagađenje ionima nečistoćama.

Analiza: Puferska kolona za pranje WB je izostavljena ili je isprana samo jednom, što je rezultiralo zaostalom ionskom kontaminacijom.

Preporuka: Obavezno dva puta isperite puferom WB prema uputama kako biste uklonili ostatke jona što je više moguće.

3. Kontaminacija RNase.

Analiza: U pufer se dodaje egzogena RNKaza;pogrešna operacija ispiranja u puferu PW će rezultirati rezidualnom RNazom i uticati na nizvodne eksperimentalne operacije RNK, kao što je in vitro transkripcija.

Sugestija: Kompleti za ekstrakciju nukleinskih kiselina iz serije Foregene mogu ukloniti RNK bez dodatne RNaze, a svi reagensi u kompletu za izolaciju DNK biljaka ne trebaju RNAzu;obavezno operite kolonu za pročišćavanje puferom PW prema uputama i ovaj korak se ne može izostaviti.

4. Ostaci etanola.

Analiza: Nakon pranja kolone za prečišćavanje puferom WB, nije izvršeno centrifugiranje prazne epruvete.

Preporuka: Pratite uputstva za pravilno centrifugiranje praznih epruveta.

Uputstvo za upotrebu:

Priručnik za upotrebu kompleta za izolaciju DNK biljaka