• facebook
  • linkedin
  • youtube

Olovo

Duga nekodirajuća RNK, lncRNA je nekodirajuća RNK dužine veće od 200 nukleotida, obično između 200-100000 nt.lncRNA regulira ekspresiju gena na epigenetskom, transkripcijskom i post-transkripcijskom nivou, te sudjeluje u utišavanju X hromozoma, utiskivanju genoma i modificiranju hromatina, aktivaciji transkripcije, interferenciji transkripcije, nuklearnom transportu, regulaciji ćelijskog ciklusa, regulaciji diferencijacije ćelija i kompenzaciji doze, bliski efekti regulacije doze i razvojni efekti koji se odnose na dozu. bolesti, i trenutno su jedna od vrućih tačaka u oblasti biomedicine.

01  Vrste i karakteristike LncRNA

vijesti723 (1)

lncRNA je podijeljena na mnoge tipove prema različitim izvorima njenog formiranja, kao što je prikazano na gornjoj slici.Ima sljedeće karakteristike:

1. lncRNA su obično duže, sa dinamičkom ekspresijom i različitim metodama spajanja tokom diferencijacije
2. U poređenju sa kodirajućim genima, lncRNA obično ima niži nivo ekspresije
3. Većina lncRNA ima očiglednu vremensku i prostornu ekspresiju specifičnost u procesu diferencijacije i razvoja tkiva
4. Karakteristični su izrazi kod tumora i drugih bolesti
5. Subcelularne lokacije lncRNA su raznolike
6. Sekvenca je niska u očuvanju, ali funkcija ima određeni stepen očuvanosti, itd.

02 Često postavljana pitanja o obrnutoj transkripciji LncRNA

Zbog niskog sadržaja lncRNA u ćelijama, duge dužine i strukture visokog nivoa, takva RNK često ima složene strukture kao što su petlje ili ukosnice, a RT-qPCR je sklon problemima neuspješne reverzne transkripcije ili niske efikasnosti.

03 Rješenje za reverznu transkripciju LncRNA

vijesti723 (2)

U središnjem pravilu, proces RNA virusa koji koriste vlastitu reverznu transkriptazu za sintezu DNK koristeći RNK kao šablon naziva se reverzna transkripcija.Proces upotrebe reverzne transkriptaze RNA virusa za sintetizaciju cDNA šablona in vitro naziva se reverzna transkripcija.Glavni elementi uključeni u sistem reverzne transkripcije: RNA šablon, reverzna transkriptaza, prajmeri i druge komponente.

1.RNA šablon

Uticaj RNK šablona na reverznu transkripciju ogleda se u njegovoj strukturi, čistoći i integritetu.Što je veća čistoća i integritet ekstrahovane RNK, to je veća efikasnost reverzne transkripcije i tačniji kasniji kvantitativni rezultati.RNK pročišćena uobičajenim reagensima za ekstrakciju RNK često sadrži ostatke soli alkohola i gvanidina, koji imaju snažan inhibitorni učinak na većinu reverzne transkriptaze.

2.Reverzna transkriptaza

Reverzna transkriptaza ima ključni uticaj na čitav sistem reverzne transkripcije.Pogodna temperatura za reverznu transkriptazu koja se koristi u većini laboratorija je općenito 42°C.Zapravo, otvaranje strukture RNK visokog nivoa zahtijeva višu temperaturu, a zahtjevi za reverznom transkriptazom su veći.

3.Primer

Prajmeri za reverznu transkripciju uključuju prajmere specifične za gen, nasumične prajmere i Oligo dT prajmere.Većina lncRNA ne sadrži poliA repove i važno je pravilno uskladiti nasumične prajmere sa Oligo dT.

4.Ostale komponente

S obzirom na činjenicu da se RNK posebno lako razgrađuje, uvođenje komponenti u sistem reverzne transkripcije može se svesti na minimum, što može efikasno spriječiti ulazak RNKaze i osigurati nesmetan napredak reverzne transkripcije.

Foregendobije iz RNA šablona, ​​reverzna transkripcija u qPCR

Sveobuhvatno pratite vašu lncRNA detekciju

news723 (3)

Ukupna RNA životinja IsolationKomplet (sa kolonom za uklanjanje gDNK)

vijesti723 (4)

Ukupna ćelijska RNA IsolationKomplet (sa kolonom za uklanjanje gDNK)

vijesti723 (5)

Lnc-RT HeroTM I (sa gDNazom) (super premiks za sintezu prvog lanca cDNK iz lncRNA)

vijesti723 (6)

PCR u realnom vremenu EasyTM-SYBR Green I

Advantages ofEkstrakcija RNK:

Komplet koristi tehnologiju ekstrakcije RNK treće generacije, nema potrebe za korištenjem DNase.

11 minuta iz kultiviranih ćelija na ploči sa 96, 24, 12 i 6 jažica, visokoefikasna ekstrakcija bez gDNK, visoke čistoće, visokokvalitetne ukupne ćelijske RNK.

Prednosti reverzne transkripcije lncRNA:

Sistem reverzne transkripcije posebno razvijen za LncRNA za brzo uklanjanje kontaminacije genomske DNK.

Sistem reverzne transkripcije ima visoku termičku stabilnost i još uvijek ima dobre performanse reverzne transkripcije na 50°C.

Šabloni sa visokim sadržajem GC i složenom sekundarnom strukturom mogu se preokrenuti sa velikom efikasnošću.

Prednostiof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase ima veću efikasnost amplifikacije, veću osjetljivost na pojačanje i veću specifičnost amplifikacije

Optimizirani Real PCR Easy Mix čini da SYBR Green I ima veću osjetljivost detekcije, a njegov intenzitet fluorescencije je 3-5 puta veći od sličnih proizvoda, što može zadovoljiti potrebe različitih tipova kvantitativnih eksperimenata fluorescencije.


Vrijeme objave: Jul-23-2021