Izgradnja SOP sistema

Uspostaviti SOP PCR eksperimenta kako bi se standardiziralo ponašanje eksperimentalnog osoblja.

Eksperimentatori se striktno pridržavaju operativnih procedura i minimiziraju zagađenje PCR-om koje može biti uzrokovano ljudskim faktorima ili spriječiti pojavu zagađenja u radu.Osim toga, eksperimentator treba da posjeduje odgovarajuća stručna znanja i vještine, uključujući stručnost u rukovanju pripadajućom opremom, pojašnjavanju cjelokupnog procesa rada, ovladavanju metodama tretmana kontaminacije i metodama laboratorijske kontrole kvaliteta, te sposobnošću da pravilno interpretira rezultate ispitivanja.

Izgradnja standardne PCR laboratorije

PCR laboratorija je u principu podijeljena u četiri područja, a to su područje za pripremu reagensa, područje za obradu uzoraka, područje amplifikacije i područje analize proizvoda amplifikacije.Prve dvije oblasti su područja prije pojačanja, a posljednje dvije oblasti su područja nakon pojačanja.Zona pre pojačanja i zona postamplifikacije treba da budu strogo odvojene.Eksperimentalni materijali, reagensi, papir za snimanje, olovke, materijali za čišćenje, itd. mogu teći samo iz područja prije amplifikacije u područje poslije amplifikacije, odnosno iz područja pripreme reagensa, područja obrade uzorka, područja amplifikacije i područja analize proizvoda amplifikacije, i ne smiju teći u obrnutom smjeru.Protok zraka u laboratoriji također treba da teče iz područja prije pojačanja u područje nakon pojačanja, a ne u obrnutom smjeru.

Smanjite eksperimentalne korake

Ako laboratorij obavlja samo PCR detekciju i identifikaciju, preporučuje se korištenje fluorescentne kvantitativne PCR umjesto konvencionalne PCR.

Rezultati kvantitativne PCR detekcije fluorescencije mogu se prikupiti i analizirati fluorescentnim signalima, tako da nema potrebe za otvaranjem poklopca za elektroforezu nakon reakcije, čime se izbjegava kontaminacija PCR proizvoda uzrokovana curenjem produkta reakcije u aerosole.Ako povećate broj otvora poklopca tokom koraka punjenja gel elektroforeze, vjerovatno će doći do kontaminacije aerosolom.Preporučuje se promovirati primjenu kvantitativne PCR i postupno zamijeniti kvalitativni PCR.

Usvojiti UNG sistem protiv zagađenja

Za PCR reakciju se koristi UNG anti-PCR sistem kontaminacije proizvoda.

Sistem koristi dUTP umjesto dTTP.Nakon PCR reakcije, svi PCR proizvodi (DNK fragmenti) se inkorporiraju sa dUTP;u sljedećem krugu PCR reakcije, enzim UNG koji je dodat sistemu se inkubira na 37°C 5 minuta prije PCR-a, što može biti specifično. Razgradite sve DNK fragmente koji sadrže dUTP, a zatim izvedite PCR reakciju.Ovo može u potpunosti ukloniti aerosolnu kontaminaciju uzrokovanu PCR proizvodima.Efekat je prikazan na slici ispod:

Napomena: Za direktnu PCR seriju, možete odabrati serijske proizvode sistema za zagađenje anti-PCR proizvoda kompanije FJ Biotech

Predloži

Za laboratorije koje provode veliko testiranje genotipizacije, snažno se preporučuje korištenje UNG anti-PCR sistema kontaminacije proizvoda za testiranje reagensa uz izgradnju razumnih laboratorija.

Podsjetnik: Upotreba ovog sistema ne može ukloniti kontaminaciju PCR proizvoda koja je već uzrokovana.Stoga UNG sistem treba koristiti na početku relevantnog testa, a UNG sistem uvijek treba koristiti za PCR amplifikaciju, kako bi se spriječila kontaminacija PCR proizvoda.Lažno pozitivan.

Preporučljivo je koristiti Direct PCR-UNG sistem Forge Biotech prilikom provođenja velikih testiranja, kao što su: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Direktan PCR set sjemena biljaka-UNG；

Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Ova serija kompleta iz kompanije Foregene ne samo da može brzo iu velikom obimu izvesti PCR detekciju, već i efikasno spriječiti i kontrolirati kontaminaciju PCR proizvoda.